說明書上都有的啊

WST-8屬于MTT的升級產品，工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物(formazan)。顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450mM波長處測定OD值，間接反映活細胞數量。

活力計算：

細胞活力*(％)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0加藥)-A(空白)] ×100

A(加藥)：具有細胞、CCK8溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A(空白)：具有培養基和CCK8溶液而沒有細胞的孔的吸光度

A(0加藥)：具有細胞、CCK8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

*細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力

下面轉帖一下別人的經驗總結：http://www.antpedia.com/news/81/t-86381.html

CCK8的說明書大家一定要認真閱讀，里面很多細節的問題都有提到。而且說明書里提供的一些關于各種細胞的種板數都很有參考價值，因為那是反復驗證過的最佳數值。但無論如何，做這個試驗一定要摸條件。你就算再懶，這個懶不得，否則你都只是在做無用功。以下言論全部以細胞毒性試驗為前提，如果你做的是促進細胞生長的藥物的藥效實驗那就另當別論了。

摸條件包括1、種板數；2、種板后細胞的貼壁生長時間；3、加藥后的孵育時間；4、cck8試劑加入量；5、cck8試劑加入后細胞孵育時間。看起來很多，其實這就是一個實驗。而且都是種的空白板，也就是不加藥物，只加細胞和CCK8。

1、種板數：這個要查文獻，看你所用細胞別人有無做過，把范圍大致找出。記住還要參考說明書，這個很重要。然后稀釋一系列濃度種板。首先你要觀察多長時間細胞可貼壁完全，一般貼壁生長24小時。然后還有在你的實驗時間內，不同細胞數下孔內生長情況。比如我擬定考察4天的時間，那么在4天內，細胞是剛好鋪滿還是堆積生長？因為每塊板都會設置對照孔，也就是含有細胞的培養基+CCK8，這個數值是板上的最大數值，CCK8試驗最佳OD值在1.0附近，所以這個最大數值最好能控制在1.0左右。我的實驗經驗是不要讓細胞長滿，一旦長滿了很難去判斷是否堆積生長了，對藥物能否順利進入細胞有影響此為其一，其二生長不均勻易導致孔間OD值數據偏差大，而且OD值也很大。

2、貼壁生長的時間我一般就直接讓它貼壁長24h了，這個時間細胞已經貼壁完全，而且這樣設置時間對自己安排實驗時間也方便。沒人愿意大半夜爬起來做實驗吧。

3、加藥后的孵育時間，我的實驗摸了3個時間，24h，48h，72h。然后根據數據的穩定性(RSD)、OD值的范圍(1.0左右)這些來選擇最好的時間。太長了就沒有必要了，細胞呆在孔里幾天不換液結果可想而知了。

4、CCK8試劑加入量，說明書中明確寫出建議加入量為培養基體積的10%。這里有一個問題：假設我要孔內是200微升的體系，即細胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢，還是細胞懸液+藥液=200微升，cck8不算在體系內呢。關于這一點文獻報道不一致。本人最終采用的是后者。

5、cck8試劑加入后孵育時間，隨著時間的增加，OD值就會增大。總之原則就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。

再說一下關于種板設置問題。眾所周知周圍一圈孔因為邊緣效應都是不用來做實驗的。一般每組樣品我會設置6個復孔，得到的OD值去掉最大值與最小值，其余取平均值。我用的是排槍，會省很多力氣，但是也會增大組內誤差。這個只有通過校正移液槍和選用最適槍頭了。

總結

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