一、熒光定量 PCR 原理

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熒光定量 PCR（Real-time PCR），是指在 PCR 擴增反應(yīng)體系中加入熒光基團，通過對擴增反應(yīng)中每一個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實時檢測，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。

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以探針法熒光定量 PCR 為例：PCR 擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。開始時，探針完整地結(jié)合在 DNA 任意一條單鏈上，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收，檢測不到熒光信號；PCR 擴增時，Taq 酶將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條 DNA 鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與 PCR 產(chǎn)物形成完全同步。

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總結(jié)

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