不同实验样品在实时荧光定量PCR检测中要求有哪些?
實(shí)時(shí)熒光定量PCR被常用于檢測(cè)生物樣品,同時(shí)也是檢測(cè)DNA、RNA含量的最普遍的方法,通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針,對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程,結(jié)合相應(yīng)軟件可以對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析,計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度。針對(duì)于不同的實(shí)驗(yàn)樣品,進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)時(shí)有不同的要求,本文將介紹給大家,動(dòng)物組織樣品、植物樣品、細(xì)胞樣品、全血樣品、RNA樣品的樣品要求。?
不同實(shí)驗(yàn)樣品在實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)中要求:
1.?動(dòng)物組織:樣本離體應(yīng)當(dāng)立即放入液氮或-80℃冰箱中速凍保存,避免反復(fù)凍融,并且樣本在-80℃的保存時(shí)間不宜過長(zhǎng),組織寄送100mg以上,脂肪組織,結(jié)締組織,纖維化組織適當(dāng)增加,干冰運(yùn)輸;
2.植物:新鮮的葉、果肉、種子等最少需100mg,干冰運(yùn)輸。
3.細(xì)胞:1×10^6個(gè)細(xì)胞,加入trizol的細(xì)胞樣本(不要直接運(yùn)輸加trizol的細(xì)胞培養(yǎng)皿),Trizol?為裂解液,不適用于組織樣本的保存,細(xì)胞除外,干冰運(yùn)輸;
4.全血:最少1 mL新鮮血液EDTA抗凝管,4度運(yùn)輸;?血清:最少1 mL,干冰運(yùn)輸;
5.RNA樣品:?OD260/280為1.8-2.0,濃度≥100 ng/μL,體積≥20μL,干冰運(yùn)輸;cDNA:cDNA原液≥20 μL,干冰運(yùn)輸;
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總結(jié)
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