点成分享丨细胞培养三步骤——复苏、传代、冻存
細胞培養是指在體外模擬生物體內環境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。
細胞培養也叫細胞克隆技術，是細胞生物學研究方法中重要和常用技術，通過細胞培養既可以獲得大量細胞，又可以借此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。
細胞培養的具體步驟可分為：細胞復蘇、細胞傳代、細胞凍存
一、細胞復蘇
1. 細胞復蘇的原則：快速融化
在復蘇細胞時必須遵循快速融化的原則，即必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至 37 ℃，因為這樣可使凍存時細胞外的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。
2. 細胞復蘇操作過程
? ?二、細胞傳代
1. 細胞傳代中遇到的問題及解決方案：
（1）傳代密度過高
一旦細胞養太久至融合度過高（>90%）才傳代，容易使細胞產生老化現象，甚至是堆疊，再消化細胞時不易吹打成單顆細胞，即便再重新鋪盤傳代，細胞也無法回到原本的特性了。（如：單層細胞，沒長滿就發生堆疊現象）
解決方案：盡量避免融合度過高，鏡下觀察融合度約達到80%即可傳代分盤。
（2）傳代密度低
哺乳動物貼壁培養細胞，若細胞培養到80-90%密度需要開始傳代，在傳代接種細胞密度過低，細胞間距離太遠，就無法在細胞間產生黏附及通信作用，幫助信號傳導并活化細胞；總體細胞量不足，分泌的生長因子濃度會不足以產生利于生長的微環境，以上皆會造成增殖速度遲緩或細胞死亡。
解決方案：細胞傳代時，要進行準確的細胞計數，確保鋪盤的密度。
2. 細胞傳代操作過程：
三、細胞凍存
1. 細胞凍存的基本原理：慢凍
(1) 手動降溫
將細胞依序放在4℃（30分鐘）、-20℃（1小時）、-80℃（過夜）后移至液氮中保存。
(2) 程序降溫盒
是一般最廣泛使用的降溫法，為一種特制冷凍容器（填充異丙醇或依靠特制金屬導熱），使細胞以每分鐘約-1℃的速度降至-80℃（過夜），然后移至液氮中保存。
(3) 免液氮程序降溫儀
一種新型自動化程序降溫方法，通過微處理器精確控制冷卻速率和樣品溫度，能夠控制樣品線性/非線性降溫，能夠有效減少凍融過程對于細胞或組織的傷害，重現性好，降溫過程可控，成本低。（例如點成生物CRF-1免液氮程序降溫儀）
2. 細胞凍存操作過程：
點成生物推薦
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點成CRF-1免液氮程序降溫儀
降溫儀頂蓋打開示意圖
點成CRF-1免液氮程序降溫儀臺式設計，外形精巧，操作簡單，有無PC連接都可進行；數據可以通過PC軟件進行記錄，冷卻數據將直接顯示在PC屏幕上，CRF-1的冷凍能力可達零下100℃(采用細管時)。CRF-1精準控制降溫速率，從而確保整個冷凍過程中溫度的精確性和重現性，尤其是在重要的成核/播種階段，這就確保了細胞解凍后的最佳恢復。
內置多種降溫程序，例如胚胎、生殖細胞、干細胞等降溫程序，用戶也可自定義降溫過程，廣泛應用于多種樣品的冷凍保存。
- 精確控制冷卻速率和樣品溫度，重現性好
- 使用方便簡單，樣品可原位成核/播種
- 可實現線性和非線性降溫方案
- 運行成本低：約為液氮降溫儀的1%
-END-
點成生物與多家先進的國際儀器制造商（Grant、Nuve、Cellix、Microfluidic ChipShop、Beonchip、Drucker等）進行深度合作，專注于生命科學、溫度控制、臨床應用、微流控等領域；提供的產品有水浴、搖床、混勻器、離心機、移液槍、恒溫振蕩器、培養箱、蒸餾水機、程序降溫儀、微流控芯片及分析系統等常用實驗儀器；致力于生物科技領域產品和解決方案。
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總結
以上是生活随笔為你收集整理的点成分享丨细胞培养三步骤——复苏、传代、冻存的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。
