高效液相色譜法（HPLC）是一種用于分離、鑒定和量化混合物中的各組分的分析技術(shù)，利用色譜柱對混合物進行分離，然后用光譜法進行鑒定和定量。在20世紀60年代，采用低壓玻璃柱的柱色譜LC進一步發(fā)展為采用高壓金屬柱的高效液相色譜HPLC。因此，高效液相色譜法基本上是一種高度改進的柱液相色譜法。溶劑不是在重力作用下通過色譜柱，而是利用高達400個大氣壓的輸液泵送入色譜柱。

HPLC工作原理

混合物各組分通過與固定相、流動相之間的相互作用，在色譜柱中進行分離純化；

固定相是存在于色譜柱中一種非常小的多孔顆粒材料，流動相是在高壓迫使下通過色譜柱的一種溶劑或混合溶劑。用注射器注入樣品，通過一個連接樣品回路的閥門，使樣品與流動相混合，隨后樣品中各組分以不同的速率通過色譜柱，由于各組分與固定相之間的吸附能力不同，各組分依次流出色譜柱，通過合適的檢測器將組分濃度轉(zhuǎn)換成電信號傳遞到計算機的HPLC軟件上。運行結(jié)束后，在HPLC軟件中就可以得到色譜圖。

HPLC儀器組成

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HPLC工作原理及儀器組成（圖片來源：迪信泰檢測平臺）

（1）高壓泵

HPLC的發(fā)展帶動了泵系統(tǒng)的發(fā)展。泵是液相色譜系統(tǒng)中最重要的組成部分，主要是將流動相從溶劑貯存器送入液相系統(tǒng)中，并在高壓下保持流量和壓力的穩(wěn)定。目前LC系統(tǒng)中使用的大多數(shù)泵都是通過電動活塞的往復(fù)運動來產(chǎn)生流量的（往復(fù)泵）。由于活塞的運動可以產(chǎn)生“脈沖”。

（2）進樣器

進樣器位于泵的旁邊。最簡單的方法是使用注射器將樣品注入液相系統(tǒng)。現(xiàn)在一般都使用六通進樣閥和自動進樣器。其中，自動進樣器可以在設(shè)定的時間內(nèi)重復(fù)進樣。

（3）色譜柱

色譜柱主要是用來分離混合物中各組分。目前常用的是不銹鋼外殼的柱子，而不是玻璃柱。通常使用的填料是二氧化硅或聚合物凝膠。用于液相色譜LC的洗脫液有酸性或堿性的，由于不銹鋼對多種溶劑具有耐受性，因此大多數(shù)柱殼由不銹鋼制成。

（4）檢測器

檢測器是將色譜柱分離出來的各組分檢測出來。當(dāng)待測物不存在時，洗脫液的成分是一致的，而加入待測物可以改變洗脫液的組成，檢測器就可以測量這種差異，并轉(zhuǎn)換成電信號傳遞給記錄儀。檢測器有多種，如紫外可見光檢測器、熒光檢測器、電化學(xué)檢測器等等。大家可根據(jù)具體的分析對象，選擇合適的檢測器，可參考迪信泰檢測平臺的<漲知識>如何選擇HPLC檢測器這篇文章。

（5）數(shù)據(jù)記錄儀
檢測器檢測到的洗脫液的變化是以電信號的形式呈現(xiàn)的，因此我們的眼睛是看不到，需要借助計算機的數(shù)據(jù)處理器（積分器）。數(shù)據(jù)處理器有多種類型，如一個簡單的由內(nèi)置打印機和文字處理器組成的系統(tǒng)，或帶有專門為LC系統(tǒng)設(shè)計的軟件系統(tǒng)，這種系統(tǒng)不僅具有數(shù)據(jù)采集功能，還具有峰值擬合、基線校正、自動濃度計算、分子量測定等功能。

（6）脫氣機

HPLC系統(tǒng)中可能存在一些肉眼看不見的氣體，會導(dǎo)致噪音增大，基線不穩(wěn)定等現(xiàn)象。脫氣機使用特殊的聚合物膜管來去除氣體，聚合物膜管表面的很多非常小的孔允許空氣通過，同時可以阻止任何液體通過。

（7）柱溫箱

液相色譜分離通常受柱溫的影響很大。為了獲得一致的結(jié)果，保持溫度一致是很重要的。對于某些分析，例如糖和有機酸，在50～80°C下可以獲得更好的結(jié)果。因此，色譜柱通常放在柱形加熱器中。

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迪信泰檢測平臺基于高效液相色譜結(jié)合以下檢測器，提供專業(yè)、高效的HPLC檢測服務(wù)，快速分析大批量樣品。

(1)紫外可見分光檢測器(UVD)

(2)雙光路雙流路紫外/熒光檢測器(UV/FLD-1)

(3)蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)

(4)液相色譜-液相色譜聯(lián)用(HPLC-HPLC)

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參考資料：Sagar Aryal. High-Performance Liquid Chromatography (HPLC).

總結(jié)

以上是生活随笔為你收集整理的HPLC工作原理及仪器组成的全部內(nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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