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编程问答

负染电镜操作

發(fā)布時(shí)間：2024/3/13 编程问答 47 豆豆

生活随笔收集整理的這篇文章主要介紹了负染电镜操作小編覺(jué)得挺不錯(cuò)的,現(xiàn)在分享給大家,幫大家做個(gè)參考.

120kV
200kV

操作面板

左面板
- α tilt、β tilt（僅雙傾桿可用）
- Track ball：beam shift
  - +/-調(diào)節(jié)移動(dòng)步長(zhǎng)
- Intensity：順時(shí)針旋轉(zhuǎn)→光斑大小↑光強(qiáng)↓
- Stigmator：像散矯正器，一般不用操作面板而用UI軟件-tune調(diào)節(jié)
- 多功能X：按軟件中定義起作用
- L1～L3：定義后作用，默認(rèn)——
  - L1：reset focus，定義正焦的focus值用
  - L3：spot size +
右
- Dark field：切換明場(chǎng)/暗場(chǎng)成像，暗場(chǎng)一般不用
- 多功能Y
- Diffraction：物鏡光闌插入時(shí)，將成像模式切換到衍射模式，可用于調(diào)節(jié)光闌對(duì)中
- Focus：調(diào)（物鏡）焦
  - 大旋鈕：調(diào)節(jié)step，一般2/3/4
  - 小旋鈕：調(diào)focus
- Wobbler：抖動(dòng)，不常用
- Eucentric focus：調(diào)節(jié)電鏡光路前恢復(fù)物鏡默認(rèn)值，使樣品位于eucentric height下聚焦
- 樣品桿：調(diào)整樣品臺(tái)的相對(duì)x/y軸位置
  - +/-調(diào)節(jié)移動(dòng)步長(zhǎng)
- z axis：調(diào)整樣品臺(tái)的相對(duì)z軸位置（調(diào)eucentric height用）
- Magnification：放大倍數(shù)
- R1～R3：定義后作用，默認(rèn)——
  - R1：抬/放熒光屏
  - R2：set defocus
  - R3：spot size -

軟件面板及信息欄

UI：電鏡的主控制軟件（左電腦的左、右上、右下三窗口）
- 信息欄
  - HT=high tension高壓值
  - 放大模式：LM—M—SA（最常用）
  - defocus數(shù)值
  - exposure time：與intensity/spot size相關(guān)，一般1.0+
  - spot size：常用2/3，D1319默認(rèn)4不改，數(shù)字↑光斑尺寸↑光強(qiáng)↓
- 下拉選項(xiàng)窗
  - stigmator
  - direct alignment：勿動(dòng)gun
  - vacuum map：亮藍(lán)=高真空，深藍(lán)=同外界
  - none=收起窗口
DM=Digital ???：外插的拍照用軟件
TIA：電鏡自帶的拍照用軟件
DM、TIA一般選其一打開(kāi)即可，同時(shí)打開(kāi)時(shí)DM容易卡死

上樣前檢查

登記本*2
進(jìn)樣孔指示燈不亮紅（故障/cryo-cycle）
收起物鏡光闌
（info賬號(hào)登陸）
UI
- log中是否有報(bào)錯(cuò)
- setup-vaccum
  - gun<20
  - col.<20，可能出現(xiàn)<40亦可，過(guò)后會(huì)抽低
  - 右擴(kuò)展窗high tension、DM按鈕未啟動(dòng)（灰色）
- setup-high tension
- camera右擴(kuò)展窗：shutter選第二項(xiàng)
- search-右擴(kuò)展-control-“reset holder”
液氮：確定無(wú)異常后可加，加滿冷阱瓶，小心沸騰

上樣

確認(rèn)已reset holder
進(jìn)樣插桿抽真空時(shí)長(zhǎng)設(shè)置：setup-vacuum-右擴(kuò)展-settings
- ??普桿60s/冷桿90s
裝載grid
- ??旋轉(zhuǎn)180度輕拍玻璃筒，檢查grid是否會(huì)掉出
- 進(jìn)樣時(shí)樣品正面（碳膜黑色面）朝下
側(cè)面pin對(duì)準(zhǔn)進(jìn)樣通道右下白線，插入至插不動(dòng)
Airlock啟動(dòng)，啟動(dòng)倒計(jì)時(shí)抽真空
Airlock完畢燈亮，迅速逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)樣品桿至轉(zhuǎn)不動(dòng)、背面短針對(duì)準(zhǔn)下方小孔（??轉(zhuǎn)動(dòng)中勿前后插）
column內(nèi)真空將樣品桿帶入（??用左手緩沖）
確認(rèn)真空值正常

啟動(dòng)

（UI）setup-high tension：120kV、固定啟動(dòng)時(shí)間30s
點(diǎn)亮“high tension”啟動(dòng)高壓
- 電場(chǎng)引起emission突升，等待恢復(fù)穩(wěn)定～0
“Filament”加熱燈絲
- emission=燈絲電流，等待趨于穩(wěn)定
兩次電鏡使用間HT、Filament可能不關(guān)，關(guān)Col. Valve即可

調(diào)光

??按部件由上到下

關(guān)燈、R1放下熒光屏
打開(kāi)柱閥：點(diǎn)滅Col. Valve close
?“eucentric focus”物鏡歸零、確認(rèn)已撤物鏡光闌（左進(jìn)右出，上樣前檢查）
光線對(duì)準(zhǔn)熒光屏中心
- 首先降低“magnification”至SA模式，SA無(wú)光則繼續(xù)降低至低倍<1000x找到光斑
- track ball+“Intensity”調(diào)整光路位置
- 無(wú)光？
  - 降低magnification
  - “Intensity”順時(shí)針?lè)糯?逆時(shí)針縮小光斑、判斷光軸位置
  - 更換樣品區(qū)域
調(diào)整聚光鏡像散：光斑是否為圓形？
- “Intensity”調(diào)整光斑至易于觀察大小
- UI下拉選項(xiàng)窗stigmator→“condenser”模式
- 多功能X/Y調(diào)整光斑形狀
- 后續(xù)隨時(shí)可調(diào)
調(diào)整聚光鏡光闌：光斑是否同心收縮？=光闌是否與光路同軸？
- “Intensity”逆時(shí)針縮小光斑至最小，對(duì)準(zhǔn)熒光屏中心
- “Intensity”順時(shí)針?lè)糯蠊獍?#xff0c;可能有偏移
- 光闌小旋鈕，使大光斑對(duì)準(zhǔn)中心
  - 大旋鈕=光闌孔徑，聚光鏡固定=4
  - 光闌下方撥片=插拔光闌，左進(jìn)右出，聚光鏡固定插入
- “Intensity”縮放光斑確認(rèn)同心收縮
調(diào)樣品臺(tái)同心高度/eucentric height
- 放大倍數(shù)4000～6000x
- 光斑散開(kāi)滿屏
- 選擇特異參照物
- set alpha=15→“Z axis”→0→樣品操縱桿→循環(huán)至位移最小
  - 首次位移過(guò)大則關(guān)閉set alpha、設(shè)置為5重新進(jìn)行
- ??更換square/grid需重新操作
合軸粗調(diào)：低倍9000～10000x下合軸
- 調(diào)整beam tilt、beam shift、rotation centre：操作見(jiàn)下
- 劉濤版本→一般沒(méi)有必要分低高倍調(diào)兩次，rotation centre可以在定義正焦前、低倍下調(diào)一次
合軸細(xì)調(diào)：高倍>20000x/拍照倍數(shù)下合軸
- 聚光鏡像散可忽略
- 定義正焦
  - 根據(jù)樣品情況減小光強(qiáng)e.g.spot size 2，exposure 1.0+差不多亮度即可
  - 預(yù)覽模式
    - （DM）“insert camera”→“start view”：設(shè)置參數(shù)刷新1s，bin4
    - （TIA）“search”
  - 調(diào)出FFT模式：“LiveFFT”
    - thon ring橢圓則需調(diào)整物鏡像散：UI下拉選項(xiàng)窗stigmator→objective模式→多功能X/Y調(diào)整thon ring形狀（對(duì)應(yīng)FFT圖像20°/60°方向）
    - “focus”順時(shí)針旋轉(zhuǎn)時(shí)thon ring變大則為欠焦?fàn)顟B(tài)，反之為過(guò)焦
    - 調(diào)整“focus”至最外圈thon ring放大鋪滿→“(L1/R2=)reset focus”定義正焦
  - 退出相機(jī)預(yù)覽
    - （DM）“stop view”→R1放屏
    - （TIA）點(diǎn)滅“search”“LiveFFT”→R1放屏
    - 調(diào)整光斑大小至適合合軸
- UI下拉選項(xiàng)窗“Direct alignment”-“beam tilt ppX&Y”：多功能XY+track ball直至晃動(dòng)的兩光斑重合，done
- UI下拉選項(xiàng)窗“Direct alignment”-“beam shift”：多功能XY+“Intensity”將光斑拖至中心，done
  - ??不能用track ball拖光斑
  - 切換到beam shift后看不到光斑時(shí)，先減小“Magnification”及“Intensity”縮小并找到光斑，再多功能鍵XY拖至中央，逐步提回高倍操作
- UI下拉選項(xiàng)窗“Direct alignment”-rotation centre
  - 樣品操縱桿使視野對(duì)準(zhǔn)碳膜邊緣
  - 多功能XY+track ball使光斑、視野振動(dòng)均最小（類(lèi)似心臟跳動(dòng)），done
插入物鏡光闌：物鏡后焦面，屏蔽高角散射、非彈性散射，提高像的襯度
- 光斑散開(kāi)滿屏
- “Diffraction”進(jìn)入衍射模式
- “Magnification”調(diào)整參數(shù)D=～680nm（類(lèi)似于放大倍數(shù)？）
- 多功能XY調(diào)整rings對(duì)準(zhǔn)中心
- 物鏡光闌下?lián)芷蜃蟛迦牍怅@（??用手緩沖）
  - 大旋鈕調(diào)光闌孔徑=4
- 物鏡光闌正、側(cè)小旋鈕調(diào)整光斑對(duì)準(zhǔn)中心
- “Diffraction”取消衍射模式

圖像觀察、拍照

熒光屏上確認(rèn)放大倍數(shù)及樣品位置
R1抬起熒光屏
重調(diào)物鏡像散、定義正焦：插入物鏡光闌的影響，操作同上
- ??更換square/grid需重新操作
DM拍攝：
- “start view”拍攝模式預(yù)覽
- “focus”微調(diào)欠焦使圖像清晰
  - 一般defocus=-3～-2，根據(jù)樣品決定
  - process-live-FFT下觀察thon rings更便于調(diào)整
- “stop view”停止預(yù)覽
- “acquire”拍攝：exposure=1.0
- 保存圖像
  - 直接關(guān)閉照片窗口→提示保存，僅tif或dm3格式
  - 選中窗口→“file”選項(xiàng)卡→“save d…”，可保存jpg格式
  - 錘子按鈕→global …→save numbered …→選中照片窗口→123按鈕=自動(dòng)編號(hào)并保存
  - ??路徑E/，每人每日更新
TIA拍攝：
- （UI）search-camera-“start view”
- 保存圖像
  - Auto save
  - 右鍵“fi?? data”，可保存為jpg等格式

下樣

調(diào)低“Magnification”=1150x
“Intensity”光斑散開(kāi)
search-右擴(kuò)展-control-“reset holder”、清空track
關(guān)閉柱閥：點(diǎn)亮Col. Valve close
關(guān)閉“Filament”
- 先登記filament emission
蓋上熒光屏玻璃板蓋，開(kāi)燈
取出樣品桿（??掉真空）
- 拔出至不動(dòng)→順時(shí)針轉(zhuǎn)至不動(dòng)→拔出桿（??保持垂直、穩(wěn)定速度）
登記本記錄各電鏡參數(shù)
當(dāng)天最后使用：setup-vacuum-右擴(kuò)展-“cryo cycle”，4～8h
- 注意第二天最早預(yù)約的時(shí)間段

總結(jié)

以上是生活随笔為你收集整理的负染电镜操作的全部?jī)?nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問(wèn)題。

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