ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法

許多試劑檢測(cè)都涉及到標(biāo)準(zhǔn)曲線的問題，究竟如何繪制或制作標(biāo)準(zhǔn)曲線呢？

用Excell和SPSS的軟件能做出來嗎？，怎么操作？能一起求出計(jì)算公式嗎？

有沒有專門的軟件來處理呢？介紹幾種？

希望有這方面經(jīng)驗(yàn)的介紹自己的經(jīng)歷，與大家分享，“與眾同樂才是真的快了”

的確，標(biāo)準(zhǔn)曲線做的好與壞會(huì)直接影響到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，甚至是關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗。

首先，做標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品檢測(cè)時(shí)有幾個(gè)問題需要注意：

1、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出來的，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事，否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無從談起。

2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測(cè)實(shí)驗(yàn)樣品的濃度，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對(duì)于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。

3、最好采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會(huì)出現(xiàn)較大的偏離。

4、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí)，應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對(duì)低濃度的影響，提高準(zhǔn)確性。

5、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個(gè)點(diǎn)，但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。

6、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動(dòng)，但一般來說，相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98，對(duì)于有些實(shí)驗(yàn)，至少要0.99甚至是0.999.

怎樣繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線？

標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度得到后，可通過計(jì)算器、Excell或SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行繪制，并得到相關(guān)的回歸方程(即計(jì)算公式)和相關(guān)系數(shù)(回歸系數(shù))，個(gè)人認(rèn)為，Excell軟件比較好用一些；SPSS也行，不過是英文的，初學(xué)者不是很容易掌握；計(jì)算器嘛太麻煩了，所以現(xiàn)在一般不用。

雙抗夾心法ELISA 擬和曲線：

擬和曲線：

打開EXCEL軟件；在工作表中

輸入第一行： 濃度值， 如0 10 50 100 400

輸入第二行：該濃度下的調(diào)整後的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42

選擇這些輸入的數(shù)據(jù)，用插入里的圖表按鈕，進(jìn)入圖表向?qū)?#xff0c;在“標(biāo)準(zhǔn)類型”中選擇“xy散點(diǎn)圖”；在“子圖表類型”中選擇“折線散點(diǎn)圖”，按“下一步”；選擇“系列產(chǎn)生在行”，按“下一步”；數(shù)據(jù)標(biāo)志，可以填寫：如數(shù)據(jù)y軸，OD值；數(shù)據(jù)x軸，濃度；按下一步，點(diǎn)擊完成。可得曲線圖。

單擊曲線，按右鍵，選擇“添加趨勢(shì)線”，在類型中，選擇多項(xiàng)式；在選項(xiàng)中，選擇顯示公式，選擇顯示R平方值。得到公式和R平方值。

也可以用上面說的方法，在公司已經(jīng)提供的圖表上， 雙擊圖表，把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中，就可以擬和新的曲線。

計(jì)算濃度：

舉例：第一次實(shí)驗(yàn)：

標(biāo)準(zhǔn)曲線為：

y = -4E-05x2 + 0.026x+0.1

R2 = 0.9745 為例，已知OD值，計(jì)算濃度。

由于y = -4E-05x2 + 0.026x+0.1，所以可以得到：

4E-05x2 －0.026x ＋(y-0.1)＝0

ax2 ＋bx ＋C＝0

a＝4E-05；b＝ －0.026； C= y-0.1

x＝(－b－(b*b－4a(y-0.1))(平方根)) /(2*a)

代入a，b，和y值，得

x＝(0.026－(0.026*0.026-0.00016*(y-0.1))(平方根))/(2*0.00004)

在excel里可以用以下公式表示：

x＝(0.026-EXP(LN(0.026*0.026-0.00016*(y-0.1))/2))/(2*0.00004)

通用公式為： Y=ax2 ＋bx ＋C

x＝(－b－EXP(LN(b*b－4a(y-c))/2))/(2*a)

您可以應(yīng)用excel的公式拷貝功能，計(jì)算所有濃度。

簡(jiǎn)化方法

如果有示例的excel表格，過程可參照附件的EXCEL表格，您的新數(shù)據(jù)可以這樣擬和：雙擊圖表，把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中，就可以擬和曲線。

根據(jù)曲線方程序，更改公式的參數(shù)，計(jì)算出濃度。

競(jìng)爭(zhēng)法擬和曲線 －－－－Logit-log 直線回歸

競(jìng)爭(zhēng)法一般情況下用Logit-log 直線回歸的方法可以擬和成近似一條直線；

令 p = OD/OD0, q = 1 - p,

y = ln (p / q), x = lg (濃度),

其中: OD 為反應(yīng)值,

OD0 為濃度為 0 的反應(yīng)值的均值,

則方程為:

y = a + b*x

總結(jié)

以上是生活随笔為你收集整理的elisa标准曲线怎么做_ELISA标准曲线的绘制方法的全部?jī)?nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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