DNA甲基化檢測服務(wù)

DNA甲基化是最早發(fā)現(xiàn)的基因表觀修飾方式之一，真核生物中的甲基化僅發(fā)生于胞嘧啶，即在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5'-端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?'-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表達(dá)，去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)。這種DNA修飾方在不改變基因序列前提下實現(xiàn)對基因表達(dá)的調(diào)控。脊椎動物DNA的甲基化狀態(tài)與生長發(fā)育調(diào)控密切相關(guān)，比如在腫瘤發(fā)生時，抑癌基因CpG島以外的CpG序列非甲基化程度增加， CpG島中的CpG則呈高度甲基化狀態(tài)，導(dǎo)致抑癌基因表達(dá)的下降。閱微基因通過以下方法提供甲基化檢測服務(wù)。

服務(wù)項目

? 1、甲基化特異性的PCR(Methylation-specific PCR，MSP)

用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變；隨后設(shè)計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR。通過電泳檢測MSP擴增產(chǎn)物，如果用針對處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴增片段，則說明該位點存在甲基化；反之，說明被檢測的位點不存在甲基化。

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2、亞硫酸氫鹽測序法(Bisulfite sequencing PCR，BSP)

用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。隨后設(shè)計BSP引物進行PCR，在擴增過程中尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶，最后對PCR產(chǎn)物進行測序就可以判斷CpG位點是否發(fā)生甲基化稱為BSP-直接測序方法。將PCR產(chǎn)物克隆至載體后進行測序，可以提高測序成功率，這種方法稱為BSP-克隆測序法。

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3、甲基化敏感擴增多態(tài)性
(Methylation-Sensitive Amplified Polymorphism,MSAP)
MSAP是利用對DNA甲基化敏感的兩種同裂酶Hpa II和Msp I來對基因組DNA進行酶切和連接。由于兩種酶能夠識別相同的限制性酶切位點，即CCGG位點。當(dāng)DNA序列中的CCGG位點出現(xiàn)不同程度的甲基化狀態(tài)時，會分別被這兩種酶識別，以有無產(chǎn)物的方式體現(xiàn)出來。

4、焦磷酸測序(Pyrosequencing)

通過準(zhǔn)確定量單個連續(xù)的CpG 位點上的甲基化頻率，焦磷酸測序能檢測并定量甲基化水平上的細(xì)微改變。在序列延伸過程中，根據(jù)C和T的摻入量來定量確定單個位點的C-T比例。因此，不同位點的甲基化變異就能被準(zhǔn)確檢測。由于焦磷酸測序提供了真實的序列數(shù)據(jù)，甲基化狀態(tài)也就以序列形式呈現(xiàn)。

服務(wù)編號

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送樣要求

? 細(xì)胞(≥106個)、組織(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等樣品材料，基因組DNA(體積≥20μl，濃度≥50 ng/μl)。

提供結(jié)果

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成功案例

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某客戶檢測病例組樣本啟動子區(qū)域甲基化情況，該區(qū)段共有39個CpG位點，一共提供10個克隆，該樣本的甲基化程度為2.3%。

SP檢測CpG甲基化區(qū)段點狀圖結(jié)果示例

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轉(zhuǎn)載于:https://www.cnblogs.com/wangprince2017/p/9815227.html

總結(jié)

以上是生活随笔為你收集整理的DNA甲基化检测服务的全部內(nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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