課程名稱： 細胞生物學實驗原理考題
選擇題 名詞解釋 問答題 合計
得 分 40 12 48 100分

一、選擇題（20 × 2）
1.細胞的無菌培養需要用到凈化工作室的潔凈級別為（）
A 100 B 1000 C 1萬 D 10萬
[參考答案]C;
凈化工作間是基于無菌條件下進行細胞培養操作的場所，設計標準為萬級，專供細胞培養、凍存以及細胞治療用。簡稱：萬級細胞間，百級超凈臺

2.用于培養細胞的液體培養基，它的滅菌條件一般是用____μm濾膜過濾？
A.0.45 μm B.0.5μm C.0.22μm D.0.3μm
[參考答案]C
細菌的大小普遍是大于或者等于0.2um，但是實際上0.2um大小的細菌很少，0.22um孔徑的濾膜足以過濾掉絕大部分細菌，甚至是環境中或者水樣中的所有細菌。0.22um，除菌過濾，細菌被截留，并且很多細菌由于受到壓力而破，死亡。0.45um，降低微生物負荷，細菌大部分被截留，并且很多細菌嵌入濾膜。培養基滅菌采用0.22um濾膜或高壓蒸汽滅菌（營養成分會流失）。
3.下列哪一個描述正確的是？
A臺盼藍可以染死細胞
B可以用平衡鹽溶液培養細胞
C.所用的培養基，均可以配置好一個月的用量放在2~8℃冰箱中保存
[參考答案] A
死亡細胞胞膜的通透性增加，可被臺盼藍染成藍色。通常認為細胞膜完整性喪失，即可認為細胞已經死亡；而普通的液體培養基，密封滅菌后放置在2-8℃冰箱內可以保存三個月，普通的培養基平板可以保存一個月或更久。但是如果培養基中含有易分解的物質，那么保留的時間就很短甚至需要現配現用。但一般培養基保存于4℃冰箱中，培養基內CO2會逐漸溢出，造成培養基越來越偏堿性。而培養基中酸堿指示劑的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿后再用于細胞培養將造成細胞生長停滯或死亡。培養基偏堿時，可以通入無菌過濾的CO2，以調整pH值。
4.設定培養細胞的二氧化碳培養箱的條件是____？
A.25℃，5% CO2 B.25℃，10% CO2 C.37℃，10% CO2 D.37℃，5% CO2
[參考答案] D
二氧化碳培養箱是通過在培養箱箱體內模擬形成一個類似細胞/組織在生物體內的生長環境，培養箱要求穩定的溫度(37°C)、穩定的CO2水平(5%)、恒定的酸堿度(pH值:7.2-7.4)、較高的相對飽和濕度(95%)，來對細胞/組織進行體外培養的一種裝置。
5.下列哪種溶液不能在含鈣鎂離子的環境中工作
A胰酶 B膠原酶 C雙抗溶液 D谷氨酰氨溶液
[參考答案] A
鈣離子和鎂離子會影響胰酶的消化能力，導致胰酶消化能力下降，培養細胞時，消化的細胞數量有限，加上細胞的密度依賴性，所以細胞培養時最好使用不含有鈣鎂離子的PBS緩沖液。
6.實驗室用的雙抗溶液一般是指____？
A.四環素-鏈霉素 B.嘌呤霉素-青霉素 C青霉素-鏈霉素
[參考答案]C
青霉素-鏈霉素（Penicillin-Streptomycin Solution）混合液，通常也被稱為“雙抗”，是體外培養中為預防微生物污染最常用的抗生素，常配制成100倍濃度母液使用。其中，青霉素能夠干擾細菌細胞壁的合成，對革蘭陽性菌特別有效；而鏈霉素能夠與細菌核糖體30S亞單位結合，抑制細菌蛋白質的合成，對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有效，但對革蘭氏陰性菌特別有效。青霉素和鏈霉素聯合使用可以預防絕大部分的細菌污染，但青霉素溶液對溫度和酸堿度較為敏感，室溫易降解，需冷凍保存，PH 6.0～6.5時最為穩定；而鏈霉素則相對穩定，PH 5.0～7.5時最為穩定
7.對于組織取材的原則不包含____？
A嚴格無菌 B要用鋒利的器械切組織，盡量減少組織的損傷
C盡量選取過分化的組織 D注意快速新鮮，盡量在4~6小時之內完成
[參考答案]C
B取材需要用鋒利的器械，正確，C.取材選擇新鮮和分化程度低的組織
8.對于用CFSE檢測細胞的增殖實驗，下列哪一個描述是正確的？
A SFEM是一種可穿過細胞膜的熒光染料
B其與細胞內分子的結合是可逆的
C子代細胞中的熒光強度是親代細胞的一倍
D對于用流式檢測SFEM，可以選擇653nm的激光做為它的激發光源
[參考答案]A
CFSE熒光染料是一種可穿透細胞膜的熒光染料，具有與細胞特異性結合的琥珀酰亞胺脂基團和具有非酶促水解作用的羥基熒光素二醋酸鹽基團，這使得CFSE成為一種良好的細胞標記物。當CFSE以含有兩個乙酸基團和一個succinimidyl ester功能基團的形式存在時，不具有熒光性質，而具有細胞膜通透性，能夠自由進入細胞；而當其擴散進入細胞內環境，內源的酯酶可將其乙酸基團水解，此種形式的CFSE分子具有很高的熒光活性，被激發能夠產生綠色熒光，卻不再具有膜通透性（不可逆）；同時，其含有的succinimidyl ester基團能與胞內的細胞骨架蛋白中的游離胺基反應，最終形成具有熒光的蛋白加合物。因此，當細胞進行分裂增殖時，具有熒光的胞質蛋白被平均分配到第二代細胞中，這樣與第一代細胞相比，其熒光強度便會減弱至一半；以此類推，分裂得到的第三代細胞的熒光強度便會比第二代細胞再次減弱。這種現象可以在488nm的激發光下，采用流式細胞儀檢測分析，通過檢測到細胞熒光強度不斷的降低，進一步分析得出細胞分裂增殖的情況。

9.進行細胞凍融時，需遵從____原則？
A.慢凍快融 B.慢凍慢融 C.快動慢融 D.快動快融
[參考答案]A
慢凍，主要是防止細胞在冷凍過程中形成冰晶，對細胞造成損害，加DMSO也是這個原理。 復蘇細胞的原則是：快融。 主要是防止DMSO在液體狀態下對細胞的毒害作用，快速使細胞進入復蘇和生長狀態。
10.在培養細胞時，發現細胞培養液中有渾濁且pH值下降，請問是什么造成了其污染？
A真菌 B細菌 C原蟲 D病毒
[參考答案]B
(1)細菌污染后培養基的pH值會突然降低，短期內顏色變黃，表明有大量酸性物質產生；
有時靜置的培養液液體初看不混濁，但稍加振蕩，就有很多混濁物漂起。倒置顯微鏡下觀察，可見培養液中有大量圓球狀顆粒漂浮。
(2)真菌污染：真菌污染培養液清亮透明，絲狀、管狀或樹枝狀菌絲縱橫交錯在細胞之間或培養基中，有的呈鏈狀排列
(3)支原體感染：細胞培養過程中, 支原體感染發生率高達30%~60%,支原體是廣泛存在于自然界中能獨立生活的最小微生物，直徑300-800 nm。更易透過0.22-0.45 μm濾膜。受支原體污染的細胞在培養時培養基的pH值不會發生改變, 也不會渾濁，因此, 很難直接觀察出細胞是否受到污染。
11.對于自噬的檢測，下列說法正確的是
A正常培養的細胞有較高的自噬活性，可以進行直接的自噬檢測
B可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察自噬小體的形成
C可以構建GFP-LC3質粒轉染細胞，當自噬形成時，細胞中的LC3蛋白會向自噬小體遷移，我們可以檢測自噬小體中的熒光點數來判斷是自噬的程度
D可以用細胞中的LC3 II/I的比值表示自噬的強弱程度，LC3 II/I值越小說明自噬越強
[參考答案]C
A.正常培養的細胞自噬活性很低，不適于觀察，因此，必須對自噬進行人工干預和調節，錯誤；
B.自噬小體屬于亞細胞結構，普通顯微鏡鏡下看不到，直接在透射電鏡下觀察自噬不同階段的形態變化是一種非常直接的方法。
C.在熒光顯微鏡下采用GFP-LC3融合蛋白來示蹤自噬形成：
由于電鏡耗時長，不利于監測（Monitoring）自噬形成，人們利用LC3在自噬形成過程中發生聚集的現象開發出了此技術。無自噬時，GFP-LC3 融合蛋白彌散在胞漿中；自噬形成時，GFP-LC3融合蛋白轉位至自噬體膜，在熒光顯微鏡下形成多個明亮的綠色熒光斑點，一個斑點相當于一個自噬體，可以 通過計數來評價自噬活性的高低。
D.自噬形成時，胞漿型LC3（即LC3-I）會酶解掉一小段多肽，轉變為（自噬體）膜型（即LC3-II），因此，LC3-II/I比值的大小可估計自噬水平的高低，值越大說明自噬越強。
12.對于凋亡的檢測，用Annexin V/PI，流式結果顯示Annexin V+/PI-，請問這一結果預示著細胞處于凋亡的哪個階段____？
A.凋亡中期 B.凋亡晚期 C.活細胞 D.凋亡早期
[參考答案]D
解析：AnnexinV是一種磷脂結合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此AnnexinV被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。碘化丙啶（Propidium Iodide,PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但凋亡中晚期的細胞和死細胞由于細胞膜通透性的增加，PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。因此，將Annexin V與PI聯合使用時，PI 則被排除在活細胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡細胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡細胞和壞死細胞同時被FITC 和PI 結合染色呈現雙陽性（Annexin V+/PI+）。
13.顯微鏡的分辨率取決于____？
A物鏡 B目鏡 C.棱鏡
[參考答案]A
顯微鏡的分辨率是由物鏡決定的，分辨率與波長和物鏡數值孔徑有關系。
14.10x單細胞測序，下列哪一個不是用于控制一個beads和一個細胞結合的
A液流緩慢 B beads數量遠大于細胞數
C后期通過QC去除 D讓一個beads和一個細胞落在一個96孔板中
[參考答案]D
10x單細胞測序的制樣要點：第一是控制cell和beads的流速，第二是beads的數目遠遠超過cell的數目，即絕大多數的beads都是空的，只有少數的才捕獲到了cell。但是還是有個別的droplet里面會兩個或者更多的細胞，通過QC進行去除。

15.10x單細胞測序的GEM不包括____？
A逆轉錄酶 B細胞 C凝膠珠 D轉座酶
[參考答案]D
10×制樣采用的Gel bead in emulsion(GEM)，凝膠珠、細胞、逆轉錄酶（反轉mRNA）是囊括在內的

16.逆轉錄病毒的有關敘述錯誤的是____？
A逆轉錄病毒可致癌
B逆轉錄病毒可以轉染非分裂的細胞
C逆轉錄病毒感染效率高，且細胞不容易死亡
D 逆轉錄病毒的轉染效率高，被感染的細胞可以持續多代繁殖
[參考答案]B
逆轉錄病毒的特點 ：①就目前所知,在大多數情況下,逆轉錄病毒的腫瘤基因（oncogene,ONC）都能夠在細胞中轉錄. ②逆轉錄病毒的寄主范圍相當廣泛,包括無脊椎動物,其中有的還能夠在人體細胞中生長； ③逆轉錄病毒不但感染效率高,而且通常不會導致寄主細胞的死亡,被它感染的或轉化的動物細胞能夠持續許多世代,保持正常生長和保持病毒感染性的能力，但逆轉錄病毒的缺點是只能感染能夠分裂的細胞，同時整合的時候會導致宿主基因組突變，有潛在的致瘤性。

17.分別取兩個品種的小鼠對它進行照射，檢測小鼠尿液中的白蛋白含量（+++，++，+），若要比較小鼠的差異情況應選擇哪種分析方法？
A. T檢驗 B f分析 C卡方分析 D非參數檢驗
[參考答案]A
A.如果是同一組患者治療前后某項指標的變化是否存在顯著差異，通常可以采用配對樣本T檢驗的方式進行考察。配對T檢驗與獨立T檢驗其中比較容易混淆的是獨立樣本t檢驗和配對樣本t檢驗。兩者的主要區別在于：配對樣本t檢驗需要兩組樣本數相等，且要求每對配對數據之間要有一定的對應關系，而獨立樣本t檢驗兩組數據的樣本個數可以不等。

B.F分析：用于兩個及兩個以上樣本均數差別的顯著性檢驗。 由于各種因素的影響，研究所得的數據呈現波動狀
C.卡方檢驗是一種用途很廣的計數資料的假設檢驗方法。它屬于非參數檢驗的范疇，主要是比較兩個及兩個以上樣本率( 構成比）以及兩個分類變量的關聯性分析。其根本思想就是在于比較理論頻數和實際頻數的吻合程度或擬合優度問題。

18.對于CRISPER-Cas9技術的優勢描述，下列錯誤的是
A只需要sgRNA，就可以對目的DNA進行特異修飾
B sgRNA比較小，容易合成
C特異性
D sgRNA短，載量低，避免了載量高帶的并發癥
[參考答案]A
CRISPER-Cas9要對目的DNA進行特異修飾，需要同時提供oligo修復模板
19.研究蛋白互作的技術不包括____？
A.SPR B.qPCR C.Co-IP D. FRET.
[參考答案]B
A.SPR 表面等離子共振（SPR）是一種光學現象，可被用來實時跟蹤在天然狀態下生物分子間的相互作用。
C. Co-IP 免疫共沉淀，經典的蛋白互作研究技術
D. 熒光共振能量轉移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)是較早發展起來的一門技術，隨著綠色熒光蛋白應用技術的發展，FRET已經成為檢測活體中生物大分子納米級距離和納米級距離變化的有力工具，在生物大分子相互作用分析、細胞生理研究、免疫分析等方面有著廣泛的應用。
20.首先提出假設（由于未經檢驗是否成立，所以稱為無效假設），用適當的統計方法確定假設成立的可能性大小，如果可能性小，則認為假設不成立，拒絕它；如果可能性大，還不能認為它不成立，這是（ A ）的過程；
A.反證法思想 B.小概率思想 C.假設檢驗 D.大概率思想
[參考答案]A
假設檢驗的原理：假設檢驗的基本思想是反證法和小概率思想。
反證法思想：首先提出假設，用適當的統計方法確定假設成立的可能性大小，如果可能性小，則認為假設不成立，拒絕它。
小概率原理：是指小概率事件在一次隨機試驗中基本不會發生；概率小于多少算小概率是相對的，在進行統計分析時要事先規定，即檢驗水準。
二、名詞解釋（3分/題）
1.一代生存期
培養細胞的“一代生存期”，是從細胞接種后到再次傳代培養之前的這一段時間。細胞傳一代后，一般歷經3個階段潛伏期、指數生長期、衰退期。
2.sgRNA
sgRNA在CRISPR-Cas9基因編輯系統中具有準確識別靶基因序列的作用。也稱向導RNA（guide RNA，gRNA），作用于動質體（kinetoplastid）體內一種稱為RNA編輯（RNA editing）的后轉錄修飾過程中。也是一種小型非編碼RNA。可與pre-mRNA配對，其效果可影響編輯的效率、是否發生脫靶。
3.瞬時轉染
瞬時轉染（transient transfection）是將DNA導入真核細胞的方式之一。在瞬時轉染中，重組DNA導入感染性強的細胞系以獲得目的基因暫時但高水平的表達。轉染的DNA不必整合到宿主染色體，可在比穩定轉染較短時間內收獲轉染的細胞。
4.組織工程
組織工程是應用細胞生物學和工程學原理,將人體某部分的組織細胞種植和吸附在一種生物材料的支架上進行人工培養繁殖、擴增,然后移植到人體內所需要的部位,從而達到器官修復或再造的治療目的的一種技術。
三、簡答題（48分）
1.簡述光學顯微鏡和電子顯微鏡的區別
區別：
1．光學顯微鏡使用可見光作為光源，而電子顯微鏡利用高能短波長電子束代替可見光。
2．光鏡的聚焦鏡使用光學學鏡片，電鏡則使用電磁透鏡。
3．成像系統不同。光學顯微鏡是利用振幅襯度，而電子顯微鏡是利用相位襯度，借助CCD成像
4．放大倍數不同，光鏡一般最大能放大到2000x，電鏡則可高達數十萬倍。
5．光鏡僅能觀察到表面微細結構，電鏡可獲取晶體結構、微細組織、化學組成、電子分布情況等。
或：
電鏡 光學顯微鏡
光源 電子束 可見光
光鏡聚焦鏡 電磁透鏡 光學棱鏡
成像系統 熒光屏、底片、CCD 凸透鏡放大
成像機制 相位襯度 振幅襯度
分辨率 nm，亞顯微結構 um，顯微結構
樣品要求 真空成像，厚度50 -80 nm左右 切片厚度 3- 5 um

2.流式細胞術四種對照和作用
1.空白對照 (negative control) 自發熒光/本底熒光對照 未染色的細胞 空白對照：不進行任何標記的細胞，主要目的是用于測定基礎熒光信號表達值。
2.同型對照：使用同種型抗體做平行實驗，主要目的是消除抗體與樣本的非特異性結合而產生的背景。
3.熒光補償對照：當多種熒光被單波長激發時，熒光發射光譜會產生重疊，為糾正熒光光譜重疊-細胞樣本分別用單獨的熒光抗體染色，來決定熒光重疊的水平，確定適合補償
4.陽性對照：一般會使用已知的高表達目標抗原的細胞做平行實驗，主要目的是排除實驗中實驗方法、試劑、操作等實驗的影響因素。
3.統計學分析方法選擇注意因素
1、看資料中的反應變量是單變量、雙變量、多變量。
2、看屬于這三種資料里的哪一種，計量資料、計數資料、等級資料
拿到數據開始分析之前，一定要進行數據類型的劃分
3、看是單因素還是多因素
4、看是單樣本、兩樣本、還是多樣本
5、看是否是配對或者配伍設計
6、看是否滿足檢驗方法所需要的前提條件
4.蛋白X與IFN-β抗病毒信號轉導通路有重要作用，蛋白X與IFN-β結合后被泛素化，設計實驗方案確定蛋白X是否被泛素化 泛素化的位點和介導的E3泛素連接酶類型
（1）目的蛋白是否被泛素化？
①WB檢測：目的蛋白降解與蛋白酶體有關
②正反向IP實驗：WB檢測泛素IP下來的蛋白中是否有目的蛋白
③蛋白酶體抑制劑能夠抑制目的蛋白的降解
（2）目的蛋白被哪個E3所催化泛素化，確定泛素化的類型
確認泛素連接酶，并當使用突變的泛素時，不能使目的蛋白泛素化
（3） 確定目的蛋白泛素化的位點

質譜鑒定

突變確定可能的區域突變其中的lysine回補實驗

5.蛋白A在跨膜蛋白，有胞外區、胞內區、跨膜區，確定蛋白A在小鼠各臟器表達的轉錄水平和蛋白水平，并設計實驗證明A基因過表達敲除或降低表達水平對細胞增殖活、細胞凋亡的影響（簡述實驗設計和方案）
實驗設計：
1、qPCR引物檢測蛋白A在各組織的表達、WB檢測各組織的蛋白表達水平
2、采用shRNA敲低或CRISPR-CAS9敲除、過表達載體進行過表達，采用WB進行驗證敲除或過表達效率
3、在第2步成功基礎上，根據其可能的功能，檢測敲除或過表達后細胞增殖和凋亡
（1）細胞增殖 ：
MTT檢測法、羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂(CFSE)檢測法 5-溴脫氧尿嘧啶核苷(Brdu)檢測法
CCK 、Ki67檢測法進行，優先選擇Brdu,可以檢測活體
（2）細胞凋亡檢測
形態學檢測：
光學顯微鏡和倒置顯微鏡1、未染色細胞：凋亡細胞的體積變小、變形，細胞膜完整但出現發泡現象，細胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細胞出現皺縮、變圓、脫落。
其他檢測方法
1.染色細胞 ：常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質濃縮、邊緣化，核膜裂解、染色質分割
2.Annexin V /PI:
3. DNA 片段化
4. TUNEL
5. 線粒體膜電位 ：而線粒體跨膜電位的下降 被認為是細胞凋亡級聯反應過程中最早發生的事件
6. 細胞色素c釋放
7. Caspase活性
8. 凋亡相關蛋白檢測

總結

以上是生活随笔為你收集整理的2022年中科大细胞生物学实验原理往年题复习参考的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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