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取材：

1.腎小管節(jié)段的分離(機(jī)械網(wǎng)篩濾過法)：
①取 Wistar 大鼠斷頸法處死，立即置入碘伏液中浸泡 5 分鐘。
②將大鼠轉(zhuǎn)移入超凈工作臺(tái)，取腰部切口迅速取出腎臟，置于盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中清洗并除去包膜和腎蒂組織。
③取皮質(zhì)置于80目篩網(wǎng)上，剪碎成1-2mm3大小組織塊，網(wǎng)下放盛有少量生理鹽水的培養(yǎng)皿。
④用玻璃注射器內(nèi)芯于80目網(wǎng)上充分研磨組織。
⑤收集 80 目網(wǎng)下液體轉(zhuǎn)移至 100 網(wǎng)篩上，用生理鹽水沖洗。
⑥將100目網(wǎng)上組織用生理鹽水沖洗入另一培養(yǎng)皿中，收集置入離心管中。1500 轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，棄去上清。

2 腎小管節(jié)段的消化及培養(yǎng)
①用1.5ml 0.25%胰蛋白酶重懸沉淀，37℃溫箱中消化約10分鐘。
②加入3ml(雙倍量)含有10%胎牛血清RPMI1640中止消化，1500 轉(zhuǎn)/分離心8分鐘，棄上清。
③加入約3ml RPMI1640 懸浮沉淀，并用吸管充分吹打混勻，接種于培養(yǎng)瓶中。
④分離腎小管節(jié)段接種于培養(yǎng)瓶后，第一天加入少量培養(yǎng)基，置入37℃,5%CO2孵育箱中靜置培養(yǎng)。
⑤培養(yǎng)過夜后，第二天加入足量的培養(yǎng)基，靜置培養(yǎng)。
⑥培養(yǎng) 72 小時(shí)后首次換液，以后每?jī)商鞊Q液一次。
⑦約第六到七天細(xì)胞生長(zhǎng)基本融合成單層。

總結(jié)

以上是生活随笔為你收集整理的大鼠原代肾小管上皮细胞培养扩增方案的全部?jī)?nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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