構(gòu)建微球原位培養(yǎng)方法實(shí)現(xiàn)牛瘤胃重要尿素分解菌分離

Functional gene-guided enrichment plus in situ microsphere cultivation enables isolation of new crucial ureolytic bacteria from the rumen of cattle

Microbiome [IF: 16.837]

DOI：10.1186/s40168-023-01510-4

發(fā)表日期：2023-04-15

第一作者: 劉思佳

通訊作者：王加啟 (jiaqiwang@vip.163.com)、趙圣國(guó) (zhaoshengguo1984@163.com)

主要單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院、蘭州大學(xué)、俄亥俄州立大學(xué)、英國(guó)貝爾法斯特女王大學(xué)

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所奶業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)在瘤胃尿素分解菌分離培養(yǎng)方面取得新進(jìn)展。研究構(gòu)建了一種基因富集結(jié)合微球原位培養(yǎng)的分離方法，實(shí)現(xiàn)了微生物高通量分離，并利用該方法從瘤胃中分離鑒定了具有脲酶活性的重要尿素分解菌，大大豐富了瘤胃微生物組資源，有助于彌合未培養(yǎng)細(xì)菌基因型和表型之間的鴻溝。相關(guān)研究成果于2023年4月發(fā)表在《Microbiome》上。

研究背景

在反芻動(dòng)物中，肝臟產(chǎn)生的尿素有40% - 80%返回胃腸道，特別是瘤胃。返回到瘤胃的尿素被尿素分解菌分泌的脲酶水解為二氧化碳和氨，氨被微生物利用合成微生物蛋白。微生物蛋白是奶和肉的主要氮來源。因此，牧場(chǎng)常使用尿素部分代替反芻動(dòng)物日糧中的優(yōu)質(zhì)蛋白飼料，以降低飼養(yǎng)成本。但是，瘤胃中尿素分解菌分泌的脲酶活性過高，尿素水解過快，導(dǎo)致大量尿素通過尿液排出體外，不僅導(dǎo)致尿素氮利用效率低，還污染環(huán)境。因此，瘤胃中的尿素分解菌引起了大量研究者的興趣。

基于培養(yǎng)和測(cè)序的研究都試圖揭示瘤胃尿素分解菌的多樣性及其功能。目前，分離培養(yǎng)的瘤胃尿素分解菌大多來自于上個(gè)世紀(jì)，是通過傳統(tǒng)的平板劃線的方法獲得的，這種方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力。在以往的研究中，只有少數(shù)幾種瘤胃尿素分解菌被分離出來，但通過高通量測(cè)序技術(shù)卻揭示了其具有高度多樣性，有近千個(gè)菌種。雖然基于測(cè)序技術(shù)有助于對(duì)瘤胃生態(tài)系統(tǒng)中尿素分解菌的多樣性和分布有一些新的認(rèn)識(shí)，但對(duì)其代謝、生理和生態(tài)仍然知之甚少。瘤胃尿素分解菌的分離和鑒定對(duì)于直接評(píng)估其基本生物學(xué)過程和特征至關(guān)重要，這為提高反芻動(dòng)物尿素利用效率提供了新的、高效的、可行的干預(yù)措施。

從瘤胃中分離新的尿素分解菌是困難的，因?yàn)樗鼈兪菂捬跫?xì)菌，且在瘤胃中豐度較低。此外，研究者對(duì)其營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生長(zhǎng)因子的需求知之甚少，無法靶向制定合適的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。此外，許多微生物在其棲息的自然生態(tài)環(huán)境中需要交叉喂養(yǎng)或與其他群落成員密切交流才能生長(zhǎng)。原位培養(yǎng)是模擬細(xì)菌在瘤胃中的生長(zhǎng)條件，克服了平板劃線分離方法的缺點(diǎn)，促進(jìn)了微生物的分離效率。樣品梯度稀釋有助于分離優(yōu)勢(shì)菌群。研究人員開發(fā)了幾種新的微生物分離技術(shù)，例如芯片、培養(yǎng)組學(xué)、單細(xì)胞分離和微流控等，以提高從不同環(huán)境中分離難以培養(yǎng)細(xì)菌的成功率。然而，這些技術(shù)需要昂貴的設(shè)備，而且分離微生物時(shí)并不是針對(duì)某些具有特定功能的群體。此外，由于尿素分解菌在瘤胃中的豐度較低，在分離之前進(jìn)行富集將有助于提高分離效率，但使用選擇性碳或氮源無法有效地富集它們。在本研究中，我們結(jié)合ureC基因富集、瓊脂糖微球包裹單細(xì)胞和原位共培養(yǎng)的方法從牛瘤胃中分離出尿素分解菌。然后，我們對(duì)分離出的尿素分解菌進(jìn)行全基因組測(cè)序，以確定其多樣性和分布，揭示了脲酶基因簇類型和脲酶活性。

1. 靶向分離尿素分解菌方法概述

我們建立了一種靶向分離尿素分解菌的方法，通過功能基因ureC富集靶標(biāo)菌群，將單細(xì)胞包裹到瓊脂糖微球中，在模擬的瘤胃環(huán)境中培養(yǎng)，最后通過基因組測(cè)序進(jìn)行鑒定（詳細(xì)流程見圖1）。該方法的優(yōu)點(diǎn)包括：利用96孔板提高了通量；利用功能基因ureCPCR篩選富集靶標(biāo)菌群；利用瓊脂糖微球包裹置于原位環(huán)境中孵育，使需要未知生長(zhǎng)因子及需要與其它細(xì)菌互作的微生物生長(zhǎng)；基因組測(cè)序揭示完整的脲酶基因簇特征。我們優(yōu)化了接種物(瘤胃液)的稀釋度，然后將富集的尿素分解菌群，稀釋后包裹到瓊脂糖微球中。連續(xù)稀釋后的瘤胃液于39℃孵育24 h，孵育結(jié)束后，利用ureC特異性引物PCR篩選，結(jié)果顯示，大于10^-1稀釋度的板子只有部分孔中存在尿素分解菌，10^-5及以上稀釋度的板子中均未檢出尿素分解菌。本研究中，10^-4稀釋度最可能將尿素分解菌分離成單菌株，因此選擇10^-4稀釋度作為富集尿素分解菌的最佳稀釋倍數(shù)。

圖1. 瘤胃厭氧尿素分解菌的富集、分離和基因組特征研究流程

我們將富集的尿素分解菌進(jìn)行梯度稀釋，將其包裹至瓊脂糖微球中，然后在一個(gè)模擬瘤胃的環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)，該系統(tǒng)允許置于透析袋內(nèi)的瓊脂糖微球中包裹的尿素分解菌與透析袋外的瘤胃微生物群進(jìn)行交叉喂養(yǎng)。瓊脂糖微球的平均直徑為3.4±0.1mm(±SD)。對(duì)每個(gè)瓊脂糖微球中菌落的16S rRNA基因擴(kuò)增并測(cè)序分析表明，隨著稀釋度的增加，包裹細(xì)菌瓊脂糖微球的比例減少，但包裹單細(xì)胞瓊脂糖微球的比例增加。其中10^-9和更高稀釋度的樣品，包裹單細(xì)胞微球的比例為100%。為了最大限度地從每個(gè)微球中分離出單菌株，我們選擇10^-10稀釋度，進(jìn)行后續(xù)研究中單菌株的分離。

培養(yǎng)時(shí)間是影響微球包裹單菌株分離成功的另一個(gè)重要因素。隨著孵育時(shí)間增加(12-72 h)，含有細(xì)菌微球的比例增加，而含有單菌株微球的比例下降。為了最大限度地從每個(gè)微球中分離出單菌株，我們選擇孵育24h，進(jìn)行后續(xù)研究中單菌株的分離。

我們采用非靶向代謝組學(xué)對(duì)透析袋內(nèi)外的代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分析，以評(píng)估透析袋內(nèi)外微生物代謝產(chǎn)物的差異，確保模擬的瘤胃環(huán)境中透析袋外的瘤胃微生物能夠?yàn)榍度朐谕肝龃鼉?nèi)瓊脂糖微球中的細(xì)菌提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生長(zhǎng)因子。我們?cè)谕肝龃湍M的瘤胃發(fā)酵系統(tǒng)中共檢測(cè)到4224種代謝物，其中109種可被識(shí)別分類。所有這些代謝物均在透析袋放入模擬發(fā)酵系統(tǒng)的6 h后被檢測(cè)到。通過聚類分析發(fā)現(xiàn)，透析袋內(nèi)外的代謝物分布隨發(fā)酵時(shí)間的變化而變化，但同一時(shí)間基本相似。透析袋內(nèi)外代謝物在各發(fā)酵時(shí)間的相關(guān)系數(shù)為0.96-0.98。

2. 分離的尿素分解菌菌株的基因組學(xué)分類

本研究共分離到了976個(gè)菌株，其中將16S rRNA基因以100%相似性進(jìn)行聚類后共得到404個(gè)菌株，將16S rRNA基因以98%相似性進(jìn)行聚類后共得到52個(gè)菌株，對(duì)這52株菌進(jìn)行全基因組測(cè)序和基因注釋，共得到28株攜帶脲酶基因的菌株。28個(gè)菌株的基因組大小范圍為1.8 - 7 Mbp，完整度>90%，污染度<7%。根據(jù)平均核苷酸同源性閾值（種<95%、屬<90%），分離到的28株菌分布在11個(gè)菌屬12個(gè)菌種。利用GTDB-TK軟件對(duì)28株菌進(jìn)行物種分類，結(jié)果顯示12個(gè)菌種分別為Pseudomonas stutzeri (1株)、Proteus penneri (1株)、Klebsiella pneumoniae (6株)、Enterobacter hormaechei (1株)、E. cloacae (1株)、Citrobacter koseri (2株)、C. farmeri (1株)、C. amalonaticus (2株)、Paraclostridium bifermentans (1株)、Clostridium butyricum (4株)、Aliarcobacter butzleri (3株) 和 Corynebacterium vitaeruminis (5株)。尿素分解菌菌株占基因組測(cè)序菌株的48%。除了菌株S90.1 (P. bifermentans)、S92.1 (E. hormaechei)和S48 (E. cloacae)外，其他尿素分解菌基于基因組和ureC構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹基本相似，表明ureC基因可作為尿素分解菌分類的系統(tǒng)發(fā)育標(biāo)記基因。

圖2. 分離的尿素分解菌的物種分類及系統(tǒng)發(fā)育

3. 評(píng)估微球原位分離方法的先進(jìn)性

本研究分離出的12種尿素分解菌與之前9項(xiàng)研究中分離出的尿素分解菌不同。與以往所有的研究相比，本研究擴(kuò)大了分離尿素分解菌的數(shù)量。在瘤胃Hungate1000項(xiàng)目中，共有17種尿素分解菌攜帶脲酶基因，根據(jù)BacDive數(shù)據(jù)庫(kù)推斷其中3種(1.7%)具有脲酶活性。在之前的10項(xiàng)研究中，共從瘤胃中分離出35種尿素分解菌，根據(jù)BacDive數(shù)據(jù)庫(kù)推斷其中24種具有脲酶活性。本研究對(duì)12種新分離的尿素分解菌的尿素水解能力進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果顯示均可水解尿素。本研究將現(xiàn)有資源庫(kù)中攜帶脲酶基因的菌種數(shù)量增加了34.38%，具有脲酶活性的菌種數(shù)量增加了45.83%。

圖3. 新尿素分解菌與以往研究的比較

4. 新尿素分解菌的分布

我們通過將分離尿素分解菌的基因組序列比對(duì)到不同反芻動(dòng)物(包括山羊、狍子、綿羊、奶牛、牦牛和水牛)的宏基因組，以評(píng)估其分布情況。根據(jù)匹配率評(píng)估尿素分解菌在上述反芻動(dòng)物瘤胃的相對(duì)豐度，以及與尿素?cái)z入量和乳品質(zhì)的關(guān)系。結(jié)果顯示，所有新分離的尿素分解菌在上述6種不同反芻動(dòng)物中都有分布，但相對(duì)豐度存在差異。除了狍子、水牛和山羊，來自同一反芻動(dòng)物物種的菌株聚集在一起。P. penneri、K. pneumoniae、C. koseri、C. farmer?和?C. amalonaticus 在奶牛瘤胃中的相對(duì)豐度高于其他5種反芻動(dòng)物。在相對(duì)豐度較高的10個(gè)菌株中，有8個(gè)來自本研究。與以往的研究相比，本研究分離出的尿素分解菌覆蓋了低豐度菌。我們發(fā)現(xiàn)，飼料中添加尿素降低了綿羊瘤胃中A. butzleri、C. vitaeruminis、E. cloacae、C. koseri、C. butyricum和 P. bifermentans?菌株的相對(duì)豐度，增加了E. hormaechei、K. pneumoniae和P. stutzeri?菌株的相對(duì)豐度。此外，有22株(占總數(shù)的51%)尿素分解菌與奶牛乳蛋白水平顯著相關(guān)，其中本研究分離的占64%。乳蛋白水平高的奶牛中P. penneri、K. pneumoniae和P. stutzeri?分離株相對(duì)豐度較高，C. vitaeruminis、A. butzleri、C. koseri、C. amalonaticus?和?C. butyricum?分離株相對(duì)豐度較低。

圖4. 尿素分解菌菌株的相對(duì)豐度、分布和作用

5. 尿素分解菌的獨(dú)特基因和糖苷水解酶家族

我們將分離到的28個(gè)尿素分解菌菌株的基因組與前人分離的尿素分解菌進(jìn)行了泛基因組比較。所有新分離株均具有獨(dú)特的基因家族，占全部基因的0.07% - 9.87%。隨著基因組數(shù)量的增加，每個(gè)物種的泛基因組大小都在增加，但并沒有達(dá)到一個(gè)平臺(tái)，表明這些物種的泛基因組處于開放狀態(tài)。根據(jù)獨(dú)特基因家族的數(shù)量和較高的注釋率，選擇3個(gè)物種(C. butyricum、P. bifermentans、K. pneumoniae)進(jìn)行獨(dú)特基因家族的分布研究。我們分別從C. butyricum、P. bifermentans和K. pneumoniae?的基因組中發(fā)現(xiàn)了65個(gè)、2662個(gè)和2637個(gè)核心基因家族。C. butyricum共有57株，其中本研究分離到4株，這4株新菌株包含3 - 420個(gè)獨(dú)特基因家族，其中菌株S11數(shù)量最多。P. bifermentans?共有16株，其中本研究分離到1株，包含73個(gè)獨(dú)特基因家族。K. pneumoniae 共有79株，其中本研究分離到6株，這6株新菌株包含3 - 254個(gè)獨(dú)特的基因家族。鑒定到的大部分獨(dú)特基因家族都與碳氮代謝相關(guān)。菌株C. butyricum S11獨(dú)特的基因家族涉及脂肪酸代謝、碳水化合物代謝和谷胱甘肽生物合成。菌株P(guān). bifermentans S90.1獨(dú)特的基因家族涉及固氮和菌毛合成。K. pneumoniae?菌株獨(dú)特的基因家族涉及L-阿拉伯糖、甲酸酯、L-蘇糖醇、D-半乳糖和D-木糖代謝，以及谷胱甘肽、纈氨酸、絲氨酸、鳥氨酸、L-蘇氨酸、丙氨酸、賴氨酸和精氨酸代謝。有趣的是，研究發(fā)現(xiàn)K. pneumoniae S26、S96和S97具有一個(gè)獨(dú)特的尿素代謝基因家族——尿素羧化酶，該基因與脲基甲酸酯水解酶共同發(fā)揮作用。

在瘤胃中以多糖為主要的碳源和能量來源，因此我們利用dbCAN和CAZy數(shù)據(jù)庫(kù)分析了28個(gè)尿素分解菌菌株的基因組，以揭示糖苷水解酶家族（GHs）的分布。我們鑒定到了參與不同類型多糖水解的GHs，包括淀粉、半纖維素、纖維素和低聚糖。同一物種的不同菌株具有相似的GHs類型和家族。C. amalonaticus、C. farmeri、C. koseri、C. butyricum、E. cloacae、E. hormaechei 和?K. pneumoniae?的菌株均含有淀粉酶、纖維素酶、半纖維素酶和低聚糖降解酶，說明它們可以廣泛利用多糖，有助于反芻動(dòng)物飼料消化吸收與利用。

圖5. 尿素分解菌泛基因組分析

6. 脲酶基因簇多樣性、脲酶活性及關(guān)鍵

氨基酸殘基

脲酶基因在尿素分解菌的基因組中通常以簇的形式出現(xiàn)，包括3個(gè)結(jié)構(gòu)基因(ureA、ureB、ureC)和附屬基因。在本研究攜帶脲酶基因的分離株中，我們發(fā)現(xiàn)了5種類型的脲酶基因簇。這些基因簇均具有上述3種結(jié)構(gòu)基因，但附屬基因的數(shù)量或順序不同。在V型脲酶基因簇中，ureC?和?ureE之間存在多個(gè)開放閱讀框。與其他類型相比，IV型和V型脲酶基因簇中包含編碼鎳跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的ureJ。

所有尿素分解菌菌株均具有脲酶活性，但尿素水解和尿素利用能力不同。菌株P(guān). penneri S99的尿素水解率最高，菌株C. amalonaticus S106的尿素水解率最低。同一種菌種不同菌株的尿素水解能力存在差異，如K. pneumoniae、C. koseri、C. amalonaticus 和 A. butzleri。培養(yǎng)基中尿素的水解率分別為K. pneumoniae 20% - 54%、C. koseri 11% - 42%、C. amalonaticus 2% - 27%和A. butzleri 13% - 28%。然而，它們利用尿素水解產(chǎn)生的氨氮的能力與水解尿素的能力并不一致。其中，菌株P(guān). bifermentans S90.1尿素氨氮利用率最高，但尿素水解效率較低。

尿素水解率與脲酶基因簇類型之間沒有關(guān)系，相同的脲酶基因簇類型的菌株之間尿素水解能力存在差異。具有脲酶基因簇類型I的菌株尿素水解率變異最大。我們將I類型脲酶基因簇菌株攜帶脲酶活性中心的UreC的氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，以揭示其調(diào)控脲酶活性的潛在機(jī)制。同一菌種不同菌株的UreC序列幾乎相同(99-100%)，而不同菌種間菌株的UreC序列相似性較低(91-98%)，其中菌株S99的UreC序列與其他菌株/種的UreC序列相似性僅為71-73%。在利用UreC氨基酸序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹上，菌株S99單獨(dú)為一個(gè)分支。我們對(duì)菌株S99的UreC活性中心的關(guān)鍵催化殘基(His¹³⁴、His¹³⁶、Lys²¹⁷、His²⁴⁶、His²⁷²、Asp³⁶⁰)進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)菌株S99的UreC活性中心的關(guān)鍵催化殘基是保守的。然而，與其他攜帶I型脲酶基因簇的分離株相比，菌株S99在覆蓋活性中心柔性環(huán)的皮瓣區(qū)域有3個(gè)突變的AAs殘基(Val³⁰⁹、Ser³²⁵、Pro³²⁷)。Ser³²⁵和Pro³²⁷位于控制活性中心打開或關(guān)閉的轉(zhuǎn)折區(qū)域。這兩個(gè)AAs殘基可能是控制S99脲酶活性關(guān)鍵位點(diǎn)。

圖6. 脲酶基因簇及分離菌株尿素水解能力的研究

7. 全文結(jié)論

本研究采用脲酶基因富集結(jié)合微球原位培養(yǎng)的方法，從瘤胃中分離出尿素分解菌。我們分離并鑒定了多種具有脲酶活性的尿素分解菌，這些新分離的菌株以前未從瘤胃中培養(yǎng)過。其中一些新分離菌株可能在氮代謝，特別是尿素代謝中發(fā)揮重要作用。這些菌株可作為模型菌進(jìn)一步了解瘤胃中氮代謝，特別是尿素代謝，以提高尿素利用率。新方法還將有助于分離其他環(huán)境中感興趣的未培養(yǎng)微生物，以更好地彌合未培養(yǎng)細(xì)菌基因型和表型之間的鴻溝。

資助情況

研究成果于2023年4月發(fā)表在《Microbiome》雜志。該成果由國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目、國(guó)家奶牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程和動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室自主課題資助.

參考文獻(xiàn)

Sijia Liu, Zhongtang Yu, Huiyue Zhong, Nan Zheng, Sharon Huws, Shengguo Zhao*, Jiaqi Wang*. Functional gene-guided enrichment plus in situ microsphere cultivation enables isolation of new crucial ureolytic bacteria from the rumen of cattle. Microbiome 2023:76

作者簡(jiǎn)介

通訊作者

王加啟

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所 研究員

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所奶業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)首席專家，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部食物與營(yíng)養(yǎng)發(fā)展研究所所長(zhǎng)，全國(guó)農(nóng)業(yè)科研杰出人才。主要從事奶牛營(yíng)養(yǎng)與牛奶質(zhì)量安全研究。獲得國(guó)家科技進(jìn)步獎(jiǎng)二等獎(jiǎng)3項(xiàng)，發(fā)表SCI論文百余篇，擔(dān)任《Journal of Dairy Science》編委。

通訊作者

趙圣國(guó)

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所 副研究員

2012年獲中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位，2011-2012年在澳大利亞CSIRO Livestock Industries做聯(lián)合培養(yǎng)博士生，2012-2014年在中國(guó)科學(xué)院微生物研究所博士后工作，2014年至今在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所工作。主要從事動(dòng)物消化道(瘤胃)微生物組學(xué)研究，揭示營(yíng)養(yǎng)素、微生物和動(dòng)物機(jī)體之間的互作關(guān)系。主持國(guó)家自然科學(xué)基金等國(guó)家級(jí)項(xiàng)目或子課題2項(xiàng)，獲神農(nóng)中華農(nóng)業(yè)科技獎(jiǎng)等科技獎(jiǎng)勵(lì)3項(xiàng)，入選農(nóng)業(yè)農(nóng)村部“杰出青年農(nóng)業(yè)科學(xué)家”。以第一或通訊作者(含共同)發(fā)表論文67篇，其中在Microbiome、Applied and Environmental Microbiology、Frontiers in Microbiology、Journal of Dairy Science等期刊發(fā)表SCI論文37篇，出版《益生菌與動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)——生產(chǎn)、效果和規(guī)范》書籍。兼任《Animal》和《生物技術(shù)通報(bào)》雜志編委，國(guó)際學(xué)術(shù)組織Metaproteomics Initiative和Anaerobic Fungi Network專家組委員。

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2卷1期

期刊簡(jiǎn)介

“iMeta” 是由威立、腸菌分會(huì)和本領(lǐng)域數(shù)百位華人科學(xué)家合作出版的開放獲取期刊，主編由中科院微生物所劉雙江研究員和荷蘭格羅寧根大學(xué)傅靜遠(yuǎn)教授擔(dān)任。目的是發(fā)表原創(chuàng)研究、方法和綜述以促進(jìn)宏基因組學(xué)、微生物組和生物信息學(xué)發(fā)展。目標(biāo)是發(fā)表前10%(IF > 15)的高影響力論文。期刊特色包括視頻投稿、可重復(fù)分析、圖片打磨、青年編委、前3年免出版費(fèi)、50萬用戶的社交媒體宣傳等。2022年2月正式創(chuàng)刊發(fā)行！

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iMeta主頁(yè)：http://www.imeta.science

出版社：https://onlinelibrary.wiley.com/journal/2770596x
投稿：https://mc.manuscriptcentral.com/imeta
郵箱：office@imeta.science

總結(jié)

以上是生活随笔為你收集整理的Microbiome | 中国农科院王加启/赵圣国构建微球原位培养方法实现牛瘤胃重要尿素分解菌分离...的全部?jī)?nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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