作者來自：南京醫科大學附屬兒童醫院

人白細胞抗原 B27(human leukocyte antigen B27，HLA-B27)與強直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis，AS)密切相關，AS 患者中 HLA-B27 的陽性率可達 90%[1]，HLA-B27 與反應性關節炎、銀屑病關節炎等其他脊椎關節病的關系也有一些研究報道 [2]。HLA-B27 對脊柱關節病的診斷和鑒別診斷有重要的參考價值。

流式細胞技術是目前檢測外周血淋巴細胞 HLA-B27 表達的主要方法之一，但 HLA-B27 參考區間缺乏統一標準，臨床實驗室多采用廠家提供的區間，這些參考值也未區分成年和兒童；目前也未見有兒童 HLA-B27 參考區間的報道。國際風濕病學會聯盟(International league of association for rheumatology，ILAR)最新標準中將傳統的幼年強直性脊柱炎歸入附著點炎癥相關型幼年特發性關節炎(enthesitis related juveniIe idiopathic arthritis，ERA)[3]。

我們在工作中會遇到這樣的情況，臨床醫生根據癥狀和體格檢查等高度懷疑患兒是一個 ERA，但是 HLA-B27 檢測結果為陰性，或為接近閾值的灰區，這就給臨床診療帶來一定困擾。我們考慮兒童和成人的 HLA-B27 表達強度是否存在差異，擬自行建立本實驗室的兒童 HLA-B27 參考區間，將新舊參考值范圍做一致性檢驗，并用健康兒童和 ERA 患兒對新參考值的診斷效果進行驗證。

研究內容

納入 460 名正常兒童作為參考區間建立人群，另納入 200 名正常兒童和 50 名 ERA 患兒作為參考區間驗證人群。正常組兒童均無 ERA 自覺癥狀，體格檢查和相關實驗室指標無異常。ERA 患兒依據 ILAR 相關標準明確診斷。由于研究人群的特殊性，臨床上完全健康的體檢兒童較少，我們將一些先心病、腺樣體肥大等對 HLA-B27 表達影響小的患兒納入到正常組。

流式細胞儀及配套 HLA-B27 試劑盒、溶血素均為同一廠家提供。以 CD3 - 藻紅蛋白(phycoerythrin，PE)標記的 T 淋巴細胞設門，檢測門內細胞 HLA-B27 表達的平均熒光強度。

正態分布的檢測數據以(x±S)表示，組間比較采用單因素方差分析；偏態分布的檢測數據以中位數 M(P2.5～P97.5)表示，組間均數比較采用非參數 Kruskal wallis 檢驗。不同參考區間采用一致性檢驗 (Kappa 檢驗)，以 kappa 值判斷 2 個參考區間的一致性，以 p<0.05 為差異有統計學意義。

研究總結及結論

1. HLA-B27 平均熒光強度檢測結果呈偏態分布(Z＝1.615，P=0.011)，采用 M(P2.5～P97.5)表示為 100(78.00～121.00)。不同年齡和性別兒童 HLA-B27 無差異(p>0.05)。HLA-B27 只在升高時才有臨床意義，因此采用百分位數法建立兒童 HLA-B27 單側參考區間為 0-121.00。舊參考區間為 0～147。?

檢測結果的正態性分布檢驗

2. 對 2 個參考區間進行一致性比較，顯示一致性較差(kappa=0.013，p<0.001)，說明用這兩個參考區間分析同一個指標時，得到的結果可能不同。

3. 新參考區間判斷正常兒童 HLA-B27 的異常率 5.0%，ERA 患兒陽性率 78%；舊參考區間判斷 HLA-B27 的異常率為 3%，ERA 患兒陽性率 26%；二者總異常率無差異(χ2=1.41，p>0.05)，陽性率有差異(χ2=49.18，p<0.001)。2 種參考區間判斷 HLA-B27 的特異性均較好，誤診率較低；但新參考值敏感性高于舊參考值，提示舊參考區間可能會造成漏診。

新參考區間用于表觀健康兒童的的診斷效果驗證

新參考區間用于幼年強直性脊柱炎患兒的診斷效果驗證

HLA-B27 在所有有核細胞表面都有表達，但主要表達于淋巴細胞。兒童免疫系統尚在發育中，免疫細胞表面抗原可能未分化完全或未充分暴露；另外，AS 只有進展到一定程度時影像學檢查才有表現出特征性的脊柱改變和骶髂關節炎癥改變，HLA-B27 表達強度是否和疾病的進展有關。我們考慮，這些因素可能會造成兒童表達強度低于成人。

延伸閱讀

除了儀器狀態、熒光抗體質量，很多實驗細節都會對流式細胞技術的檢測結果有重要影響。我們曾用某品牌生理鹽水作為離心重懸細胞這一步驟的溶液，發現所有 HLA-B27 檢測結果比用 PBS 緩沖液(PH=7.4)的檢測結果低 5-22，可能是生理鹽水本身的 PH 就不是熒光染料的最佳 PH，而且生理鹽水基本不具有緩沖能力，維持溶液 PH 穩定的能力差，這就會造成一些靠近閾值的陽性結果檢測為陰性，出現漏診。這也提醒我們，在日常檢驗工作中不放過每一個不起眼的 “細枝末節”，這樣才能確保檢測結果的真實準確。

參考資料:

1.Jung, S.H., S.M. Cho, S.H. Yim, et al., Developing a Risk-scoring Model for Ankylosing Spondylitis Based on a Combination of HLA-B27, Single-nucleotide Polymorphism, and Copy Number Variant Markers.?J Rheumatol[J], 2016. 43(12): 2136-2141.

2.Rosenbaum, J.T.,M. Asquith, The microbiome and HLA-B27-associated acute anterior uveitis.?Nat Rev Rheumatol[J], 2018. 14(12): 704-713.

3.Petty, R.E., T.R. Southwood, P. Manners, et al., International League of Associations for Rheumatology classification of juvenile idiopathic arthritis: second revision, Edmonton, 2001.?Journal of Rheumatology[J], 2004. 31(2): 390-392.

總結

以上是生活随笔為你收集整理的区间比较_表观健康儿童 HLAB27 的参考值区间建立和验证的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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