作者來自：南京醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院

人白細胞抗原 B27(human leukocyte antigen B27，HLA-B27)與強直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis，AS)密切相關(guān)，AS 患者中 HLA-B27 的陽性率可達 90%[1]，HLA-B27 與反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎等其他脊椎關(guān)節(jié)病的關(guān)系也有一些研究報道 [2]。HLA-B27 對脊柱關(guān)節(jié)病的診斷和鑒別診斷有重要的參考價值。

流式細胞技術(shù)是目前檢測外周血淋巴細胞 HLA-B27 表達的主要方法之一，但 HLA-B27 參考區(qū)間缺乏統(tǒng)一標準，臨床實驗室多采用廠家提供的區(qū)間，這些參考值也未區(qū)分成年和兒童；目前也未見有兒童 HLA-B27 參考區(qū)間的報道。國際風濕病學會聯(lián)盟(International league of association for rheumatology，ILAR)最新標準中將傳統(tǒng)的幼年強直性脊柱炎歸入附著點炎癥相關(guān)型幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎(enthesitis related juveniIe idiopathic arthritis，ERA)[3]。

我們在工作中會遇到這樣的情況，臨床醫(yī)生根據(jù)癥狀和體格檢查等高度懷疑患兒是一個 ERA，但是 HLA-B27 檢測結(jié)果為陰性，或為接近閾值的灰區(qū)，這就給臨床診療帶來一定困擾。我們考慮兒童和成人的 HLA-B27 表達強度是否存在差異，擬自行建立本實驗室的兒童 HLA-B27 參考區(qū)間，將新舊參考值范圍做一致性檢驗，并用健康兒童和 ERA 患兒對新參考值的診斷效果進行驗證。

研究內(nèi)容

納入 460 名正常兒童作為參考區(qū)間建立人群，另納入 200 名正常兒童和 50 名 ERA 患兒作為參考區(qū)間驗證人群。正常組兒童均無 ERA 自覺癥狀，體格檢查和相關(guān)實驗室指標無異常。ERA 患兒依據(jù) ILAR 相關(guān)標準明確診斷。由于研究人群的特殊性，臨床上完全健康的體檢兒童較少，我們將一些先心病、腺樣體肥大等對 HLA-B27 表達影響小的患兒納入到正常組。

流式細胞儀及配套 HLA-B27 試劑盒、溶血素均為同一廠家提供。以 CD3 - 藻紅蛋白(phycoerythrin，PE)標記的 T 淋巴細胞設(shè)門，檢測門內(nèi)細胞 HLA-B27 表達的平均熒光強度。

正態(tài)分布的檢測數(shù)據(jù)以(x±S)表示，組間比較采用單因素方差分析；偏態(tài)分布的檢測數(shù)據(jù)以中位數(shù) M(P2.5～P97.5)表示，組間均數(shù)比較采用非參數(shù) Kruskal wallis 檢驗。不同參考區(qū)間采用一致性檢驗 (Kappa 檢驗)，以 kappa 值判斷 2 個參考區(qū)間的一致性，以 p<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

研究總結(jié)及結(jié)論

1. HLA-B27 平均熒光強度檢測結(jié)果呈偏態(tài)分布(Z＝1.615，P=0.011)，采用 M(P2.5～P97.5)表示為 100(78.00～121.00)。不同年齡和性別兒童 HLA-B27 無差異(p>0.05)。HLA-B27 只在升高時才有臨床意義，因此采用百分位數(shù)法建立兒童 HLA-B27 單側(cè)參考區(qū)間為 0-121.00。舊參考區(qū)間為 0～147。?

檢測結(jié)果的正態(tài)性分布檢驗

2. 對 2 個參考區(qū)間進行一致性比較，顯示一致性較差(kappa=0.013，p<0.001)，說明用這兩個參考區(qū)間分析同一個指標時，得到的結(jié)果可能不同。

3. 新參考區(qū)間判斷正常兒童 HLA-B27 的異常率 5.0%，ERA 患兒陽性率 78%；舊參考區(qū)間判斷 HLA-B27 的異常率為 3%，ERA 患兒陽性率 26%；二者總異常率無差異(χ2=1.41，p>0.05)，陽性率有差異(χ2=49.18，p<0.001)。2 種參考區(qū)間判斷 HLA-B27 的特異性均較好，誤診率較低；但新參考值敏感性高于舊參考值，提示舊參考區(qū)間可能會造成漏診。

新參考區(qū)間用于表觀健康兒童的的診斷效果驗證

新參考區(qū)間用于幼年強直性脊柱炎患兒的診斷效果驗證

HLA-B27 在所有有核細胞表面都有表達，但主要表達于淋巴細胞。兒童免疫系統(tǒng)尚在發(fā)育中，免疫細胞表面抗原可能未分化完全或未充分暴露；另外，AS 只有進展到一定程度時影像學檢查才有表現(xiàn)出特征性的脊柱改變和骶髂關(guān)節(jié)炎癥改變，HLA-B27 表達強度是否和疾病的進展有關(guān)。我們考慮，這些因素可能會造成兒童表達強度低于成人。

延伸閱讀

除了儀器狀態(tài)、熒光抗體質(zhì)量，很多實驗細節(jié)都會對流式細胞技術(shù)的檢測結(jié)果有重要影響。我們曾用某品牌生理鹽水作為離心重懸細胞這一步驟的溶液，發(fā)現(xiàn)所有 HLA-B27 檢測結(jié)果比用 PBS 緩沖液(PH=7.4)的檢測結(jié)果低 5-22，可能是生理鹽水本身的 PH 就不是熒光染料的最佳 PH，而且生理鹽水基本不具有緩沖能力，維持溶液 PH 穩(wěn)定的能力差，這就會造成一些靠近閾值的陽性結(jié)果檢測為陰性，出現(xiàn)漏診。這也提醒我們，在日常檢驗工作中不放過每一個不起眼的 “細枝末節(jié)”，這樣才能確保檢測結(jié)果的真實準確。

參考資料:

1.Jung, S.H., S.M. Cho, S.H. Yim, et al., Developing a Risk-scoring Model for Ankylosing Spondylitis Based on a Combination of HLA-B27, Single-nucleotide Polymorphism, and Copy Number Variant Markers.?J Rheumatol[J], 2016. 43(12): 2136-2141.

2.Rosenbaum, J.T.,M. Asquith, The microbiome and HLA-B27-associated acute anterior uveitis.?Nat Rev Rheumatol[J], 2018. 14(12): 704-713.

3.Petty, R.E., T.R. Southwood, P. Manners, et al., International League of Associations for Rheumatology classification of juvenile idiopathic arthritis: second revision, Edmonton, 2001.?Journal of Rheumatology[J], 2004. 31(2): 390-392.

總結(jié)

以上是生活随笔為你收集整理的区间比较_表观健康儿童 HLAB27 的参考值区间建立和验证的全部內(nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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