俗話說，一個生物學博士，要跑滿1000面膠才能畢業。今天特邀實驗室博三大師兄，和大家聊一聊WB內參那些小事。

選擇好合適并且好跑的內參，WB實驗也就成功了一半。

1. 什么是內參？

內參即內部參照，一般是指由管家基因編碼表達的蛋白，它們在各組織和細胞中的表達相對恒定，在檢測蛋白的表達水平變化時常用它來做參照物

2. 內參的作用是什么？

（1）校正蛋白樣品定量以及上樣過程中的誤差，保證實驗結果的準確性

（2）作為空白對照，檢測WB過程中蛋白轉膜是否完全以及發光顯色體系是否正常

3. 如何選擇內參？

（1）根據樣本的種屬來源選擇，如哺乳動物或者植物等

（2）考慮目的蛋白的分子量大小，一般需要與目的蛋白的分子量相差5kd以上

（3）根據蛋白表達位置選擇不同的內參，不同的細胞器中選擇的內參也不同

（4）內參的選擇需要考慮試驗處理條件對于內參表達的影響：

• 由于GAPDH是糖酵解過程中的酶，所以關于糖代謝的研究（如糖尿病模型）不能選擇GAPDH作為內參；而某些細胞中，缺氧也會影響GAPDH的表達，此時也不可以選擇GAPDH作為內參
• 做細胞骨架相關的研究時不能選擇β-actin作為內參
• 做細胞毒性實驗時，TATA binding protein和Lamin B會發生變化，此時不可以選擇其作為內參

最后，是一些個人實驗過程中的感悟和想法。

我自己是在做腫瘤方面的課題，除了做糖代謝方面最好不選擇GAPDH作為內參外，將腫瘤組織與正常組織相比時，最好也不要選擇GAPDH作為內參，因為很多腫瘤組織中的GAPDH相對于正常組織是高表達的，并且有文獻報道GAPDH可以作為腫瘤標志物。

一般情況下，做全細胞和細胞質的WB實驗時，選擇β-actin基本能滿足大部分的需要。而考察細胞核樣品時，由于Histone H3是染色體的組成型表達組分，表達相當穩定，并且特別好跑，可以算是細胞核內參的首選

另外，針對一些特定的內參，蛋白上樣量超過一定的量時，出來的條帶可能不會有顯著的差別。以前看過一篇文獻講的應該是β-actin，當上樣量超過20 μg時，條帶灰度不會呈線性的增加。因此，在做WB校正時，調節合適的上樣量也是影響實驗成功較大的一個因素。

原文發表于 Island Academic Express

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總結

以上是生活随笔為你收集整理的3蛋白wb_老司机手把手教你选WB内参的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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