實時熒光定量技術是什么

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20世界90年代由美國Applied Biosystems公司推出實時熒光定量PCR技術（Real-time qPCR），其基本原理是在常規(guī)PCR基礎上添加熒光染料或熒光染料探針，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR過程。熒光定量PCR最大的優(yōu)勢可以對初始模板進行定量，目前已廣泛應用于生命科學、醫(yī)學研究等領域。

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小編總結熒光定量PCR常見問題打包給各位 ，現(xiàn)整理如下，請大家批評指正。

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常見問題羅列

沒有CT值

實驗結果一旦遇到?jīng)]有Ct值情況，就要在第一時間排查是否有以下問題：

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（1）循環(huán)數(shù)不夠（但是一般不超過45循環(huán)，不僅背景值提高，定量也不準）；

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（2）PCR程序設置不對，檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時采集，TaqMan法則一般在退火結束時或延伸時采集信號，另外熒光采集是否選中；

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（3）引物或探針降解。可通過PAGE電泳檢測引物和探針是否降解；

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（4）模板量可能降解或上樣量不足（但一般不超過500ng，根據(jù)試劑盒說明書即可），對未知濃度的樣品應從系列稀釋樣本的最高濃度做起；如果發(fā)生模板降解，應考慮樣品準備中雜質的引入及反復凍融的情況，建議將模板樣品小量分裝儲備，避免反復凍融；

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總結

以上是生活随笔為你收集整理的超全荧光定量PCR应用常见问题的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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