质粒抽提常见问题与解答
菌種老化
建議：對(duì)于甘油保存的菌種，需要先進(jìn)行活化，涂布或者劃線菌種，重新挑選單菌落進(jìn)行液體培養(yǎng)，并對(duì)菌種進(jìn)行初搖活化，按照1:500的比例進(jìn)行菌種培養(yǎng)。二次培養(yǎng)時(shí)間最好不要超出16小時(shí)(或者OD600不超過(guò)3.0)。
低拷貝質(zhì)粒
建議：如果是由于低拷貝質(zhì)粒引起的質(zhì)粒收獲量低，可以采用兩倍的菌體量，并相應(yīng)增加各種Buffer的用量。
質(zhì)粒丟失
建議：某些質(zhì)粒在次繼代培養(yǎng)的過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)丟失的想象，另外檢查篩選抗生素的濃度是否正確。
裂解不充分
建議：如果采用超過(guò)推薦量的菌體進(jìn)行質(zhì)粒制備，會(huì)導(dǎo)致菌體裂解不充分。可適當(dāng)減少菌體的用量或者相應(yīng)增大各種Buffer的用量。并確保細(xì)菌混懸均勻。
EBuffer中有沉淀未溶解
建議：BufferB1和BufferN1，BufferC1在溫度較低時(shí)會(huì)出現(xiàn)沉淀，使用前請(qǐng)檢查是否有沉淀生成，如果有沉淀生成，請(qǐng)置于37℃溫育片刻，待溶液澄清后使用。
WashBuffer中未加入要求量的乙醇
建議：按照說(shuō)明書(shū)要求加入要求量的無(wú)水乙醇，使用后旋緊瓶蓋，防止乙醇揮發(fā)。另外對(duì)于質(zhì)粒中提，大提等，要求用70%乙醇洗滌，請(qǐng)確保乙醇的體積不小于70%。
離心柱中乙醇?xì)埩?/strong>
建議：漂洗后，可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間，盡量去除殘留的乙醇。另外對(duì)于質(zhì)粒中提，大提和朝大量提取，建議離心后，將柱子或大漏斗用吹風(fēng)機(jī)冷風(fēng)吹片刻(或置于65℃烘箱)，以徹底去除殘留的乙醇，便于洗脫和后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作。
洗脫液加入位置不正確
建議：洗脫液應(yīng)加在膜中央，已取得最好的洗脫效果。
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總結(jié)
以上是生活随笔為你收集整理的质粒抽提常见问题与解答的全部?jī)?nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問(wèn)題。
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