流式細胞術（Flow Cytometry，FCM）是一種對液流中排成單列的細胞或其它生物微粒（如微球、細菌、小型模式生物等）逐個進行快速定量分析和分選的技術，被廣泛的運用于從基礎研究到臨床實踐的各個方面，涵蓋了細胞生物學、免疫學、血液學、腫瘤學、藥理學、遺傳學及臨床檢驗等領域，在各學科中發揮著重要的作用。

如上圖所示：細胞懸液在通過流式細胞儀時，一次僅可通過一個細胞，那么機器是怎么分辨不同細胞的呢？這也是我們理解流式細胞圖的關鍵。

在此之前，我們先來了解一個概念：流式通道。

流式通道主要可以分為散射光通道和熒光通道：散射光通道有兩個，包括FSC通道和SSC通道，而不同型號的流式細胞儀其熒光通道的多少差異較大，有的甚至沒有熒光通道。

1.散射光通道

FSC，即前向角散射，它的值代表細胞的大小。細胞體積越大，其FSC值就越大。所以可以利用細胞的FSC值初步比較細胞的大小，利用FSC值對細胞進行分群和分類。

SSC，即側向角散射，它的值代表細胞的顆粒度（與細胞中所含的細胞器、細胞核等的數量成正比）。細胞越不規則，細胞表面的突起越多，細胞內能夠引起激光散射的細胞器或者顆粒性物質越多，其SSC值就越大。所以可以利用細胞的SSC值初步比較細胞的顆粒度，利用SSC值對細胞進行分群和分類。

當細胞通過激光束時，檢測器會檢測到細胞或顆粒的散射光，放置在前面的檢測器檢測FSC，而放置在側面的多個檢測器檢測SSC。這樣我們得到的就是細胞的物理特征，根據其物理特征進行分群分類。

2.熒光通道

熒光通道表示的不是細胞特有的物理特征，而是其化學特征。如需要檢測樣品中是否有細胞表達某一CD分子，就將這一CD分子的抗體與特定的熒光素偶聯，這種熒光素通過熒光通道時會被激發而產生熒光。這樣該抗體與被檢細胞結合后，就可以被識別到，我們也就能得到就能得到該樣品中是否有細胞表達該CD分子（即區分陽性細胞和陰性細胞），以及有多少比例的細胞表達該CD分子等信息。

熒光通道接收到的信號越強，表示細胞上結合的熒光素越多，那么細胞表面表達的該CD分子就越多，因此可根據熒光信號的強弱判斷細胞表達該CD分子的相對數量。總之，熒光通道值反映接收到的熒光信號的強弱，從而反映細胞上結合的熒光素的量，進一步反映細胞上表達該CD分子的量，最后間接反映細胞表達某CD分子這一化學特征。

了解了這個概念后，我們就可以很容易的看懂流式細胞圖在表達什么。

流式圖最常用的是流式直方圖和流式散點圖，還有一種流式等高線圖。流式直方圖只能顯示一個通道的信息，流式散點圖和流式等高線圖可以同時顯示2個通道的信息。

1.流式直方圖

流式直方圖是在統計學直方圖的基礎上進一步發展而成的。我們可以簡單的理解為曲線上該點對應的y軸值就是x軸代表的通道的熒光信號值對應的細胞數。

圖（1）中10⁰～10¹（M1）為陰性細胞，10¹以上的（M2）為陽性細胞；圖（2）中2N代表G0/G1期細胞，4N代表G2/M期細胞，兩者中間代表S期細胞。

值得注意的是，不同細胞群的FSC值和SSC值最多相差幾倍，而熒光信號強弱之間一般相差很大，陰性細胞與陽性細胞之間、強陽性與弱陽性之間有時可以相差幾十倍、幾百倍，甚至幾千倍，呈指數關系。所以，流式圖數軸上FSC值和SSC值以“一般數序形式”表示，而熒光通道值常以“對數形式”（logarithmic scale）表示，在識圖時需要注意數軸的表示形式。當然，并不是所有的熒光通道值都以“對數形式”表示，當熒光信號值相差不多時，也可以“一般數序形式”表示。

2.流式散點圖

流式散點圖能夠同時表示兩個通道的信息，更加直觀和常用，x軸表示一個通道的值，y軸表示另一個通道的值，圖中每一點代表一個細胞，該點所對應的橫坐標值就是該點所代表細胞的x軸通道的值，所對應的縱坐標值就是該點所代表細胞的y軸通道的值。

如圖表示的是某正常人外周血白細胞FSC－SSC散點圖。FSC代表細胞的大小，SSC代表細胞的顆粒度，從圖中可以看出，根據細胞的大小和顆粒度，正常人外周血白細胞可以分為3群。小細胞、小顆粒度的紅色細胞群是淋巴細胞群，T細胞、B細胞和NK細胞都位于此淋巴細胞群；中細胞、中顆粒度的綠色細胞群是單核細胞群；大細胞、大顆粒度的黃色細胞群是中性粒細胞群。

一般在流式分析過程中，先利用FSC-SSC物理圖根據細胞的大小和顆粒度將細胞進行分群，然后根據目標細胞處于哪個群體，再將該群體細胞設門（set gate），進一步分析該群體中的目標細胞。

門（gate）是流式分析過程中一個較為重要的概念，流式分析時有時不希望所有的樣品細胞都顯示于流式圖中，而是希望只顯示感興趣的細胞，排除其他非相關細胞的干擾，使顯示的信息更加直觀，更具有針對性。例如，分析CD25⁺調節性T細胞占CD4⁺T細胞的比例時，此時可以根據CD4的表達情況，將CD4⁺T細胞設門顯示于一個新的流式圖中，則該流式圖只顯示所設門內的細胞，即只顯示CD4⁺T細胞，其他無關細胞不會被顯示。在相應散點圖中x軸代表CD4信息，y軸代表CD25信息，這樣就可以非常直觀地計算出調節性T細胞的比例。說白了就是框定一個區域的細胞，讓計算機分析該區域各類細胞的比例。

3.流式等高線圖

流式等高線圖與流式散點圖相似，一張流式等高線圖也能同時顯示兩個通道的信息，所不同的是，流式等高線圖借助地理等高線圖表示細胞的密集程度，流式等高線圖的環線代表的是細胞密度相同的區域，所以，等高線越密集的地方表示此區域細胞密度變化越快，環線的中央區域代表細胞聚集的中心。

流式等高線圖的意義和實際應用與流式散點圖較為相似，可以看作是流式散點圖的一個變體。相比之下，流式散點圖更為直觀，所以應用也更為廣泛。當然，流式等高線圖也有其自身的優點，它較能直觀地體現細胞群的集中點，等密度環線的中央區域代表一個細胞群的集中點，一般代表一個細胞群，所以在某些情況下，流式等高線圖比流式散點圖更能直觀地體現細胞的分群。

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總結

以上是生活随笔為你收集整理的解读文献里的那些图——流式细胞术的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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