化学合成的RNA与体外转录的RNA有什么不同?
生活随笔
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化学合成的RNA与体外转录的RNA有什么不同?
小編覺得挺不錯的,現(xiàn)在分享給大家,幫大家做個參考.
同一序列無論是化學合成還是體外轉(zhuǎn)錄理論上來講,都是一樣的。但是化學合成,人為控制,準確度高, 與提供的序列一致。但是體外轉(zhuǎn)錄是一個復雜的事件,涉及到RNA聚合酶的作用、逆轉(zhuǎn)錄體系、逆轉(zhuǎn)錄條件、模板單鏈DNA的二級結構等因素,使得擴增出來的產(chǎn)物可能長短不一,經(jīng)酶切后出現(xiàn)LADDER。 同理,在做DNA擴增時,通常采用大腸桿菌中的克隆系統(tǒng)來擴增測序正確的片段而非直接利用PCR產(chǎn)物。 總之,化學合成RNA準確,但成本高,不適合需要大量RNA模板的實驗;體外轉(zhuǎn)錄方便快捷,成本相對較低,適用一般的實驗需要,若要構建克隆文庫,則需要準確的RNA序列。
如同樓上所說,生物體內(nèi)的RNA轉(zhuǎn)錄是個復雜的過程,該過程一些環(huán)境的變化會影響各種酶的表達,從而轉(zhuǎn)錄出不同的RNA長度。而公司化學合成時,嚴格控制條件,同時又經(jīng)過高度純化,從而使獲得的RNA大小相似。
關于該問題,個人覺得可以這樣來解釋。化學合成的,最大的特點就是就是序列的專一性,你需要什么它合成的就是那段序列。但是體外轉(zhuǎn)錄的就是不一樣,樓主提取的RNA根據(jù)瓊脂糖電泳的結果來看,它本身就是彌散的,因為我們知道轉(zhuǎn)錄是一個時空產(chǎn)物,可能在這樣一個條件下就會有很多的產(chǎn)物,所以樓主在做酶切的時候切出很多條帶是很正常的。
如同樓上所說,生物體內(nèi)的RNA轉(zhuǎn)錄是個復雜的過程,該過程一些環(huán)境的變化會影響各種酶的表達,從而轉(zhuǎn)錄出不同的RNA長度。而公司化學合成時,嚴格控制條件,同時又經(jīng)過高度純化,從而使獲得的RNA大小相似。
關于該問題,個人覺得可以這樣來解釋。化學合成的,最大的特點就是就是序列的專一性,你需要什么它合成的就是那段序列。但是體外轉(zhuǎn)錄的就是不一樣,樓主提取的RNA根據(jù)瓊脂糖電泳的結果來看,它本身就是彌散的,因為我們知道轉(zhuǎn)錄是一個時空產(chǎn)物,可能在這樣一個條件下就會有很多的產(chǎn)物,所以樓主在做酶切的時候切出很多條帶是很正常的。
總結
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