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怎样进行基因表达产物的功能分析?

發(fā)布時(shí)間:2023/11/22 万象百科 37 博士
生活随笔 收集整理的這篇文章主要介紹了 怎样进行基因表达产物的功能分析? 小編覺得挺不錯(cuò)的,現(xiàn)在分享給大家,幫大家做個(gè)參考.
確實(shí)不容易。一樓說的方式使驗(yàn)證基因功能,樓主是想問基因表達(dá)產(chǎn)物的功能分析,我知道的就是做原核表達(dá),在菌株中誘導(dǎo)基因產(chǎn)物,基因產(chǎn)物即蛋白,你將該蛋白分離,分離后你可以驗(yàn)證其在什么過程中發(fā)揮作用,一般來說,作用的底物都是需要公司購買的。

這個(gè)雖然有難度,但策略還是很多的,具體有:(1)找已知功能的同源蛋白或同源結(jié)構(gòu)域,推論功能并用實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證;(2)在細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)該基因,觀察其對細(xì)胞各種功能的影響;(3)利用反義核酸,RNA干涉,核酶在細(xì)胞水平抑制基因表達(dá),從而分析細(xì)胞功能變化,建立基因剔除小鼠,分析該基因產(chǎn)物的功能;(4)分析與該基因產(chǎn)物相互作用分子,或者是相互作用的蛋白分子或核酸。

每個(gè)人的理解不同,要求也不一樣。如果是未知的功能,直接驗(yàn)證蛋白功能很難,并且影響因素太多。我們一般間接研究,大致三個(gè)方面:過表達(dá)看特定功能是否增強(qiáng);敲除或沉默后看特定功能是否喪失;轉(zhuǎn)基因看是否表現(xiàn)出特定功能。

我們實(shí)驗(yàn)室這里做的話最常用的是western bolt,不過這個(gè)基本上還是有一些前期成果作為依據(jù)的。還有一個(gè)個(gè)人覺得比較好的就是SILAC技術(shù),有反應(yīng)直接有變化,接下來在做一些具體的相互反應(yīng)什么的~

總結(jié)

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