我說一下我知道的部分。熒光定量PCR需要采用具有5‘-3’外切酶活性的Taq酶擴(kuò)增，合成一對普通引物和一條熒光雙標(biāo)記的Taq-Man探針。要準(zhǔn)確體現(xiàn)表達(dá)水平，半定量RT-PCR, 熒光定量PCR擴(kuò)增的循環(huán)數(shù)比常規(guī)少，擴(kuò)增產(chǎn)物一般都要求處在線性區(qū)，如果擴(kuò)增過程已到達(dá)平臺區(qū)，擴(kuò)增產(chǎn)物就不能反映基因拷貝數(shù)的高低。

在檢測基因表達(dá)上qPCR應(yīng)該比Northern blot更加靈敏，定量上也更準(zhǔn)確，而且Northern blot在操作中比qPCR更容易被RNase污染。Northern blot用RNA上樣，中間可能涉及RNA提取，放置降解，等量上樣等問題，持續(xù)時(shí)間長，是傳統(tǒng)的方法。qPCR不用調(diào)模板濃度，根據(jù)管家基因歸一化，熒光檢測，快速。為保證結(jié)果正確，需一定的重復(fù)次數(shù)。

總結(jié)

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