基因工程技术中获取目的基因的方法有哪些?
生活随笔
收集整理的這篇文章主要介紹了
基因工程技术中获取目的基因的方法有哪些?
小編覺得挺不錯的,現在分享給大家,幫大家做個參考.
cDNA文庫,樓上都提到了,我就不說了,基本上就是PCR手段了。還有一些像是鳥槍法這個也用的很多。最最簡單的就是直接分離了~
樓主說的主要是針對已知序列的基因如何獲取,如果是針對針對序列未知的基因,最常用的方法是構建一個基因文庫或者是cDNA文庫,從中篩選出目的基因再進行克隆來得到。構建基因文庫的話,就要先把染色體DNA片段化,再選擇合適的噬菌體做載體,之后將片段化的DNA與載體進行連接并包裝外殼蛋白,最后用得到的重組噬菌體去感染大腸桿菌,得到的溶菌產物即為基因文庫。得到的文庫后期還需要進行鑒定,以便需要時可隨時進行擴增。如果是構建cDNA文庫,則需要先將mRNA逆轉錄生成cDNA,然后再進行片段化,它和基因文庫的唯一區別就是DNA來源不同,拿到DNA后的構建步驟基本一致。
我們所說的基因,是指mRNA,將mRNA反轉錄之后,得到RNA-DNA雜合cDNA雙鏈,想得到基因,那就設計引物,從cDNA中PCR獲得基因片段。如果知識片段序列,那就直接設計引物,PCR拉出全長就可。人工合成的話,成本太高,一般是想設計一段序列,用于以后的實驗。
補充一樓二樓的吧。目前獲取預測基因序列的方式非常多樣的。除了上面說的構建cDNA文庫,還有通過轉錄組測序這也是一種很好的辦法。方法就是提取合格的樣品,然后進行測序和拼接,不過一般得到了就是unigene或者contigs,還需要按照一樓的方法進行克隆。還有就是假如你研究的某個樹種的基因已經得到測序了,那么直接在數據庫里搜集就可以的。
樓主說的主要是針對已知序列的基因如何獲取,如果是針對針對序列未知的基因,最常用的方法是構建一個基因文庫或者是cDNA文庫,從中篩選出目的基因再進行克隆來得到。構建基因文庫的話,就要先把染色體DNA片段化,再選擇合適的噬菌體做載體,之后將片段化的DNA與載體進行連接并包裝外殼蛋白,最后用得到的重組噬菌體去感染大腸桿菌,得到的溶菌產物即為基因文庫。得到的文庫后期還需要進行鑒定,以便需要時可隨時進行擴增。如果是構建cDNA文庫,則需要先將mRNA逆轉錄生成cDNA,然后再進行片段化,它和基因文庫的唯一區別就是DNA來源不同,拿到DNA后的構建步驟基本一致。
我們所說的基因,是指mRNA,將mRNA反轉錄之后,得到RNA-DNA雜合cDNA雙鏈,想得到基因,那就設計引物,從cDNA中PCR獲得基因片段。如果知識片段序列,那就直接設計引物,PCR拉出全長就可。人工合成的話,成本太高,一般是想設計一段序列,用于以后的實驗。
補充一樓二樓的吧。目前獲取預測基因序列的方式非常多樣的。除了上面說的構建cDNA文庫,還有通過轉錄組測序這也是一種很好的辦法。方法就是提取合格的樣品,然后進行測序和拼接,不過一般得到了就是unigene或者contigs,還需要按照一樓的方法進行克隆。還有就是假如你研究的某個樹種的基因已經得到測序了,那么直接在數據庫里搜集就可以的。
總結
以上是生活随笔為你收集整理的基因工程技术中获取目的基因的方法有哪些?的全部內容,希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。
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