对疾病进行DNA诊断的方法有哪些?
生活随笔
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对疾病进行DNA诊断的方法有哪些?
小編覺得挺不錯的,現在分享給大家,幫大家做個參考.
這個有很多種,截止目前,常見的有:①基因的P C R 體外擴增;② DNA液相雜交和固相點雜交;③限制性片段長度多態性( R F L P ) 連鎖分析;④基因限制酶酶譜分析;⑤熒光原位雜交;⑥寡核苷酸探針雜交;⑦ DNA測序;⑧ DNA芯片;等多種方法都可以進行DNA診斷。
1.基因雜交,用帶熒光標記的DNA或RNA序列,與未知基因雜交,如果發生結合,說明有互補序列,證明有該基因存在,如果不能雜交,證明沒有該基因。2.Southern印跡法(Southern blot)。其基本原理是:硝酸纖維膜或尼龍濾膜對單鏈DNA的吸附能力很強,當電泳后凝膠經過DNA變性處理,覆以上述濾膜,再于其上方壓上多層干燥的吸水紙,借助它對深鹽溶液的上吸作用,凝膠上的單鏈DNA將轉移到濾膜上。轉移是原位的,即DNA片段的位置保持不變。轉移結束后,經過80℃烘烤的DNA,將原位地固定于膜上。 當含有特定基因片段已原位轉移到膜上后,即可與同位素標記了的探針進行雜交,并將雜交的信號顯示出來。雜交通常在塑料袋中進行,袋內放置上述雜交濾膜,加入含有變性后探針的雜交溶液后,在一定溫度下讓單鏈探針DNA與固定于膜上的單鏈基因DNA分子按堿基到互補原理充分結合。結合是特異的,例如只有β珠蛋白基因DNA才能結合上β珠蛋白的探針。雜交后,洗去膜上的未組合的探針,將Ⅹ線膠片覆于膜上,在暗盒中日光進行放射自顯影。結合了同位素標記探針的DNA片段所在部位將顯示黑色的雜交帶,基因的缺失或突變則可能導致帶的缺失或位置改變。
1.基因雜交,用帶熒光標記的DNA或RNA序列,與未知基因雜交,如果發生結合,說明有互補序列,證明有該基因存在,如果不能雜交,證明沒有該基因。2.Southern印跡法(Southern blot)。其基本原理是:硝酸纖維膜或尼龍濾膜對單鏈DNA的吸附能力很強,當電泳后凝膠經過DNA變性處理,覆以上述濾膜,再于其上方壓上多層干燥的吸水紙,借助它對深鹽溶液的上吸作用,凝膠上的單鏈DNA將轉移到濾膜上。轉移是原位的,即DNA片段的位置保持不變。轉移結束后,經過80℃烘烤的DNA,將原位地固定于膜上。 當含有特定基因片段已原位轉移到膜上后,即可與同位素標記了的探針進行雜交,并將雜交的信號顯示出來。雜交通常在塑料袋中進行,袋內放置上述雜交濾膜,加入含有變性后探針的雜交溶液后,在一定溫度下讓單鏈探針DNA與固定于膜上的單鏈基因DNA分子按堿基到互補原理充分結合。結合是特異的,例如只有β珠蛋白基因DNA才能結合上β珠蛋白的探針。雜交后,洗去膜上的未組合的探針,將Ⅹ線膠片覆于膜上,在暗盒中日光進行放射自顯影。結合了同位素標記探針的DNA片段所在部位將顯示黑色的雜交帶,基因的缺失或突變則可能導致帶的缺失或位置改變。
總結
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