怎样能利用基因方式防治血栓形成和血管再狭窄?
生活随笔
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怎样能利用基因方式防治血栓形成和血管再狭窄?
小編覺得挺不錯的,現在分享給大家,幫大家做個參考.
血栓形成是急性心肌梗塞(AMI)最主要的原因,也是PTCA術后再狹窄的原因,所以預防血栓形成是防治冠心病最主要手段。Dichek等將轉染t-PA基因的頸動脈內皮細胞種植在血管內支架(stenst)上,經證實在體外有高水平表達的t-PA。Eckin使用改構t-PA轉染狗的隱靜脈內皮細胞后,種植于stents表面,再將這種stents置人狗骼動脈,獲得了防止再狹窄75%成功率。用這種方法可以將抗凝、溶栓或抑制增生藥物分子種植在支架上,改善支架功能和預防再狹窄,對介入治療和預防再發梗塞都有巨大功效。
構建人血栓調節蛋白(hTM)基因真核表達質粒,并導入兩種真核細胞[非洲綠猴腎母細胞(COS-7細胞)和臍靜脈內皮細胞(HUVECs)]中表達,為臨床血栓病的基因治療提供實驗依據和物質基礎.方法采用PCR法擴增hTM基因的表達片段,HindⅢ+EcoRⅠ酶切后與pcDNA3.1(+)/neo質粒連接成pcDNA3.1/hTM.經鑒定確認后,由陽離子脂質體包裹轉染COS-7細胞及HUVECs,RT-PCR和免疫組化法分別檢測轉染后細胞hTM的mRNA及蛋白的表達.結果雙酶切及測序鑒定均證實hTM基因表達片段被成功克隆,pcDNA3.1/hTM經脂質體介導能有效地轉染COS-7細胞和HUVECVs.結論成功構建pcDNA3.1/hTM重組質粒,并且能在兩種真核細胞中高效表達,為進一步的基因治療和對TM抗凝機理研究提供了物質基礎.
構建人血栓調節蛋白(hTM)基因真核表達質粒,并導入兩種真核細胞[非洲綠猴腎母細胞(COS-7細胞)和臍靜脈內皮細胞(HUVECs)]中表達,為臨床血栓病的基因治療提供實驗依據和物質基礎.方法采用PCR法擴增hTM基因的表達片段,HindⅢ+EcoRⅠ酶切后與pcDNA3.1(+)/neo質粒連接成pcDNA3.1/hTM.經鑒定確認后,由陽離子脂質體包裹轉染COS-7細胞及HUVECs,RT-PCR和免疫組化法分別檢測轉染后細胞hTM的mRNA及蛋白的表達.結果雙酶切及測序鑒定均證實hTM基因表達片段被成功克隆,pcDNA3.1/hTM經脂質體介導能有效地轉染COS-7細胞和HUVECVs.結論成功構建pcDNA3.1/hTM重組質粒,并且能在兩種真核細胞中高效表達,為進一步的基因治療和對TM抗凝機理研究提供了物質基礎.
總結
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