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RPA有可能取代PCR吗?

發布時間:2023/11/23 万象百科 36 博士
生活随笔 收集整理的這篇文章主要介紹了 RPA有可能取代PCR吗? 小編覺得挺不錯的,現在分享給大家,幫大家做個參考.
個人覺得不能,自從PCR技術發明以后,各種基因的克隆都運用了PCR技術,現在PCR無論從技術的成熟方面到結果的準確方面都是具有優勢的,并且傳統的PCR利用的DNA聚合酶非常的便宜,所以現在幾乎每個做分子方面的研究都會用到,而RAP技術雖然有很多優點,但還沒有普及。

很有可能取代PCR。RPA主要依賴于三種酶:能結合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性,最佳反應溫度在37°C左右。重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物,能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會發生鏈交換反應形成并啟動DNA合成,對模板上的目標區域進行指數式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結合,防止進一步替換。在這個體系中,由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非常快,一般可在十分鐘之內獲得可檢出水平的擴增產物。常規PCR必須經過變性、退火、延伸三個步驟,而PCR儀本質上就是一個控制溫度升降的設備。RPA反應的最適溫度在37°C-42°C之間,無需變性,在常溫下即可進行。這無疑能大大加快PCR的速度。此外,由于不需要溫控設備,RPA可以真正實現便攜式的快速核酸檢測。RPA檢測的靈敏度很高,能夠將痕量的核酸(尤其是DNA)模板擴增到可以檢出的水平,從單個模板分子得到大約1012擴增產物。而且RPA還用不著復雜的樣品處理,適用于無法提取核酸的實地檢測。RPA既可以擴增DNA也可以擴增RNA,還省去了額外的cDNA合成步驟。你不僅可以對擴增產物進行終點檢測,還可以對擴增過程進行實時監控,甚至可以通過試紙條(側流層析試紙條LFD)讀取結果。目前,TwistAmp?試劑盒的擴增子長度在500bp以內。不過,經過特別優化的RPA擴增,也可以生成更長的擴增產物,或者減慢擴增速度(便于定量),甚至在更低的溫度下進行反應。

總結

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