质粒的提取(质粒)
大家好!今天讓小編來大家介紹下關于質粒的提取(質粒)的問題,以下是小編對此問題的歸納整理,讓我們一起來看看吧。
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1、質粒 質粒是染色體外能夠進行自主復制的遺傳單位,包括真核生物的細胞器和細菌細胞中染色體以外的脫氧核糖核酸(DNA)分子。
2、現在習慣上用來專指細菌、酵母菌和放線菌等生物中染色體以外的DNA分子。
3、在基因工程中質粒常被用做基因的載體。
4、 目前,已發現有質粒的細菌有幾百種,已知的絕大多數的細菌質粒都是閉合環狀DNA分子(簡稱cccDNA)。
5、細菌質粒的相對分子質量一般較小,約為細菌染色體的0.5%~3%。
6、根據相對分子質量的大小,大致上可以把質粒分成大小兩類:較大一類的相對分子質量是40×106以上,較小一類的相對分子質量是10×106以下(少數質粒的相對分子質量介于兩者之間)。
7、每個細胞中的質粒數主要決定于質粒本身的復制特性。
8、按照復制性質,可以把質粒分為兩類:一類是嚴緊型質粒,當細胞染色體復制一次時,質粒也復制一次,每個細胞內只有1~2個質粒;另一類是松弛型質粒,當染色體復制停止后仍然能繼續復制,每一個細胞內一般有20個左右質粒。
9、一般分子量較大的質粒屬嚴緊型。
10、分子量較小的質粒屬松弛型。
11、質粒的復制有時和它們的宿主細胞有關,某些質粒在大腸桿菌內的復制屬嚴緊型,而在變形桿菌內則屬松弛型。
12、 在基因工程中,常用人工構建的質粒作為載體。
13、人工構建的質粒可以集多種有用的特征于一體,如含多種單一酶切位點、抗生素耐藥性等。
14、常用的人工質粒運載體有pBR322、pSC101。
15、pBR322含有抗四環素基因(Tcr)和抗氨芐青霉素基因(Apr),并含有5種內切酶的單一切點。
16、如果將DNA片段插入EcoRI切點,不會影響兩個抗生素基因的表達。
17、但是如果將DNA片段插入到Hind III、Bam H I 或 Sal I切點,就會使抗四環素基因失活。
18、這時,含有DNA插入片段的pBR322將使宿主細菌抗氨芐青霉素,但對四環素敏感。
19、沒有DNA插入片段的pBR322會使宿主細菌既抗氨芐青霉素又抗四環素,而沒有pBR322質粒的細菌將對氨芐青霉素和四環素都敏感。
20、pSC101與pBR322相似,只是沒有抗氨芐青霉素基因和PstI切點。
21、質粒運載體的最大插入片段約為10 kb(kb表示為千堿基對)。
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以上就是小編對于質粒的提取(質粒)問題和相關問題的解答了,質粒的提取(質粒)的問題希望對你有用!
總結
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