PacBio相对于二代测序还有哪些劣势?
生活随笔
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PacBio相对于二代测序还有哪些劣势?
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軟件不夠好,很吃內存
PacBio的單分子三代測序,該測序儀最大的特點就是測序長度比454更長,更加有利于基因組的拼接工作,有些較小的微生物可以直接將基因組測通成環狀。相對于二代測序,突破性的三代測序有如下優勢:1)單分子實時檢測,每條堿基鏈的數據都得到評估,更易發現稀有變異2)最低DNA樣品量僅500ng,無需PCR擴增,測序覆蓋深度不受序列中 GC含量差異影響??梢詫?100%A+T區域測序3)除堿基序列信息外,可同時獲得動力學信息,因此可對諸如 DNA甲基化之類的堿基變化情況直接進行分析4)無與倫比的長序列讀長5)測序速度快,聚合酶反應速度(平均) 1 base/sec,從樣本制備到出結果,需時 1天6)靈活性極強,有一系列數據管理和分析軟件使二代三代測序流程實現無縫整合7)測序流程簡單
1.成本高,PacBio的試劑成本和測序成本比二代測序高了好幾倍;2. 通量低,一個cell好像只有幾百M,一個run能跑8個cell,比二代還是低了不少;3. 錯誤率高,不過現在試劑升級了,準確性提高不少,而且錯誤率這個問題多跑一些cycles也能解決。
一個SMRT就產生380m,通量偏低
PacBio的單分子三代測序,該測序儀最大的特點就是測序長度比454更長,更加有利于基因組的拼接工作,有些較小的微生物可以直接將基因組測通成環狀。相對于二代測序,突破性的三代測序有如下優勢:1)單分子實時檢測,每條堿基鏈的數據都得到評估,更易發現稀有變異2)最低DNA樣品量僅500ng,無需PCR擴增,測序覆蓋深度不受序列中 GC含量差異影響??梢詫?100%A+T區域測序3)除堿基序列信息外,可同時獲得動力學信息,因此可對諸如 DNA甲基化之類的堿基變化情況直接進行分析4)無與倫比的長序列讀長5)測序速度快,聚合酶反應速度(平均) 1 base/sec,從樣本制備到出結果,需時 1天6)靈活性極強,有一系列數據管理和分析軟件使二代三代測序流程實現無縫整合7)測序流程簡單
1.成本高,PacBio的試劑成本和測序成本比二代測序高了好幾倍;2. 通量低,一個cell好像只有幾百M,一個run能跑8個cell,比二代還是低了不少;3. 錯誤率高,不過現在試劑升級了,準確性提高不少,而且錯誤率這個問題多跑一些cycles也能解決。
一個SMRT就產生380m,通量偏低
總結
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