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PCR引物纯化的方法有哪些呢?

發布時間:2023/11/23 万象百科 86 博士
生活随笔 收集整理的這篇文章主要介紹了 PCR引物纯化的方法有哪些呢? 小編覺得挺不錯的,現在分享給大家,幫大家做個參考.
采用OPC純化,制品純度大于90%。此級別制品可用作PCR引物,DNA測序引物、各種探針等。該級別只提供長度在35mer以下的合成DNA制品。序列更長時,制品的純度得不到保證。采用PAGE純化,制品純度大于95%。如訂購的DNA欲用作RT-PCR引物、各種探針,或用于PCR克隆測序、定點突變等,請選用PAGE純化制品。當合成的DNA的序列較長(≥40mer)時,PAGE是最好的純化方法。采用HPLC純化,制品純度大于99%。由于制品純度非常高,使用本法純化的DNA制品可適用于各種基因工程實驗。特別是:PCR克隆、定點突變、人工合成基因等。不過,本法只對純化較短序列(<40mer)特別有效,合成更長序列(≥40mer)時,請選擇PAGE純化制品。

有以下幾種方法:1.C18柱脫鹽:它對DNA有特異性的吸附,可以被有機溶解洗脫,但不會被水洗脫,這種方法一般不會對普通PCR反應產生影響。對于需要用于測序、克隆的引物不能使用這個級別。2.OPC純化: OPC法純化的DNA純度大于95%。適用于40mer以下引物的純化。3.PAGE純:PAGE純化法是使用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳,對DNA片段進行分離,然后從凝膠中回收目的DNA的方法。PAGE純化法也是一種非常有效的DNA純化方法,純化后的DNA純度大于95%,對長鏈Oligo DNA (大于50mer)的純化特別有效。 4.HPLC純化:HPLC純化是使用高效液相色譜的原理,對DNA片段進行純化。純度可以大于99%。主要用于短鏈和修飾引物的純化。該法的弱點是成本較高,批量生產效率不高。

總結

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