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基因敲除具体是什么?技术路线是什么?

發布時間:2023/11/24 万象百科 65 博士
生活随笔 收集整理的這篇文章主要介紹了 基因敲除具体是什么?技术路线是什么? 小編覺得挺不錯的,現在分享給大家,幫大家做個參考.
1、基因敲除(geneknockout),是指對一個結構已知但功能未知的基因,從分子水平上設計實驗,將該基因去除,或用其它順序相近基因取代,然后從整體觀察實驗動物,推測相應基因的功能。這與早期生理學研究中常用的切除部分-觀察整體-推測功能的三部曲思想相似。基因敲除除可中止某一基因的表達外,還包括引入新基因及引入定點突變。既可以是用突變基因或其它基因敲除相應的正常基因,也可以用正常基因敲除相應的突變基因。2、基因敲除的技術路線如下:(1)構建重組基因載體﹔(2)用電穿孔、顯微注射等方法把重組DNA轉入受體細胞核內﹔(3)用選擇培養基篩選已擊中的細胞﹔(4)將擊中細胞轉入胚胎使其生長成為轉基因動物,對轉基因動物進行形態觀察及分子生物學檢測。

通過基因打靶技術制備基因敲除小鼠模型技術路線:根據需要構建打靶載體,然后轉染到胚胎干細胞中,通過藥物篩選、長距離PCR及Southern等一系列的鑒定,得到正確中靶的胚胎干細胞克隆,并注射到供體囊胚里面,發育成嵌合鼠。將嵌合鼠與野生型的小鼠交配,如果嵌合鼠的生殖細胞是由植入的胚胎干細胞發育而成,就會將對胚胎干細胞的遺傳修飾遺傳給后代,從而在后代中檢測到成功發生基因打靶、并且能夠遺傳建系的小鼠。

簡單的說基因敲除是指將目標基因從基因組中刪除。舉一個簡單的例子:比如有一段"序列":"1234567890"(原基因),敲除后為:"123 7890",一般一個敲除載體還會在其中插入一段外源基因,如"ABC",則新的基因為:"123ABC7890";或者不插入基因直接連接,則為“1237890”。

基因敲除是將細胞基因組中某基因去除或使基因失去活性的技術。去除原核生物細胞、真核生物的生殖細胞、體細胞或干細胞基因組中的基因等。廣義的基因敲除包括某個或某些基因的完全敲除、部分敲除、基因調控序列的敲除以及成段基因組序列的敲除。常用同源重組的方法。敲除的基因用以觀察生物或細胞的表型變化,是研究基因功能的重要手段。

總結

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