由于RNaseH降解mRNA的機制在體外及體內(nèi)反義效應中均起重要作用,因而使用RNaseH酶切體外作圖分析,作為一種篩選策略非常有意義.在體外,為了驗證通過篩選技術(shù)獲得的位點而設計的反義寡核苷酸,需要分析寡核苷酸介導RNaseH對mRNA的切割作用。在細胞內(nèi),也可將反義核酸導入培養(yǎng)細胞或?qū)嶒瀯游矬w內(nèi)進行試驗,分析基因表達受到抑制的效果,來驗證和判斷.在這些試驗中,應該嚴格設立兩種對照組:一、同一基因非靶位點(未被篩選的序列)的一段反義鏈序列作為組間陰性對照;二、篩選獲得的位點反義序列通過人工突變2~4堿基作為組內(nèi)陰性對照。

總結(jié)

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