在基于高通量測序的無創(chuàng)產(chǎn)前診斷中，科學(xué)家為了提高檢測準(zhǔn)確性、并節(jié)省測序成本，想了許多辦法。檢測囊泡DNA是一種新的大幅提高檢測準(zhǔn)確性的手段。這種方法的原理是：在懷孕2~3月齡時，母親血液中約50%的囊泡是來自胎兒的。來自胎兒的囊泡中幾乎是純的胎兒DNA相比于血漿游離DNA中胎兒DNA占5~10%的比例，所有囊泡DNA中胎兒DNA的占比要高得多針對胎兒染色體異常，對囊泡DNA進(jìn)行測序，相對于測血漿游離DNA，檢出靈敏度會高許多

檢測囊泡DNA確實能夠大幅提高檢測的準(zhǔn)確性。其方法大概可以概括為，取得血清后，用DNase酶進(jìn)行處理，DNase無法進(jìn)入囊泡，只能消化掉囊泡外的游離DNA。囊泡內(nèi)的DNA得以保存。再用Proteinase K蛋白消化酶處理，蛋白酶把DNase消化掉用苯酚/氯仿處理，把所有的蛋白（包括Proteinase K)變性破壞掉，同時也把囊泡的膜破掉，囊泡中的DNA釋放出來。水相用乙醇/異丙醇沉淀回收DNA，對回收的DNA進(jìn)行高通量測序（也可以考慮用DD-PCR或其它方法進(jìn)行定量檢測）。檢測片段大小在200bp左右的血漿游離DNA，因為只有小片段的DNA才更易透過母親與胎兒之間的胎盤屏障，進(jìn)入母親的血液中，所以母血中小片段（200bp)中，胎兒的DNA的占比會高，通過電泳/柱回收等手段，提取小片段DNA進(jìn)行高通量測序。這一方法已被多家實驗室采用。相關(guān)文獻(xiàn): http://www.clinchem.org/content/50/6/1002.short。

總結(jié)

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