樣品條帶很淺原因很多，可能原始蛋白的濃度掌握不是很好，上樣很稀這樣是個很重要的原因。此外在賦予一抗的時候最好4度過夜，溫度太高非特異性結合會變多，導致后期背景較黑。另外在洗滌NC膜或PVDF膜應采用PBST或TBST緩沖溶液，這樣可以促進抗體和表位的特異結合。

可能因為膠凝的不均勻，聚合的不是很好，灌膠的時候盡量混勻。可能是你樣品的問題，如果鹽濃度較高，便會擠壓其它條帶，致使條帶寬窄不一，由于同樣的原因，樣品在凝膠中的速度會很慢，造成條帶走的較慢，好像與你的預想不一致。常見的原因是：每孔上樣量不均勻，應確保每孔中上樣量一致。可能是系統的pH出了問題，有可能是你的電極緩沖液，也有可能是凝膠緩沖液，更新緩沖液看看，看是否能成功。

總結

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