GDF-5基因重組腺病毒研究是為進一步研究GDF-5的生物學功能及其相關疾病的基因治療奠定基礎。近日，南充市中心醫院研究人員發表論文，旨在應用AdEasy-1腺病毒載體系統構建人生長分化子-5（GDF-5）基因重組腺病毒載體，并在HEK293細胞中擴增制備重組腺病毒。研究指出，利用AdEasy-1腺病毒載體系統成功構建了攜帶人GDF-5基因的重組腺病毒載體，并制備出高滴度值的重組腺病毒Ad-GDF-5，該文發表在2014年第12期《重慶醫學》雜志上。將PCR獲取的GDF-5基因插入到質粒pMD19-T中，基因測序鑒定后將目的基因克隆至腺病毒穿梭質粒pShuttle-CMV，HindⅢ酶切鑒定。重組質粒經PmeⅠ酶切使之線性化并去磷酸化處理，電轉化含腺病毒骨架質粒pAdEasy-1的感受態大腸埃希菌BJ5183，使其在細菌內發生同源重組，卡那霉素篩選，HindⅢ酶切鑒定陽性克隆，擴增重組腺病毒質粒，并轉染HEK293細胞，包裝成重組腺病毒Ad-GDF-5，分別采用Western blot、TCID50法對Ad-GDF-5進行蛋白鑒定和滴度測定。經PCR擴增得到的GDF-5大小約為1.7kb，基因測序結果證實該基因與GENBANK中人GDF-5基因序列相同。pShuttle-CMV-GDF-5、pShuttle-CMV-GDF-5-AdEasy-1經HindⅢ酶切后均得到大小約為1.7kb的片段，與GDF-5大小相符。Western blot證實Ad-GDF-5感染HEK293細胞后大量表達成熟GDF-5蛋白。研究結果表明成功地構建了攜帶人GDF-5基因的重組腺病毒載體，并制備出5.6×109 PFU/mL的重組腺病毒。

總結

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