基因轉(zhuǎn)移是用物理的、化學(xué)的或生物學(xué)的方法將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞并使之表達(dá)的一種技術(shù)。物理方法包括顯微鏡注射法、電脈沖介導(dǎo)法。顯微注射法是應(yīng)用特別的玻璃顯微注射器在顯微鏡下把重組DNA導(dǎo)入靶細(xì)胞；電脈沖介導(dǎo)法又稱電穿孔法，是指在高壓電脈沖的作用下，使細(xì)胞膜上出現(xiàn)瞬間微小的孔洞，從而介導(dǎo)不同細(xì)胞之間的原生質(zhì)膜發(fā)生融合，使外源DNA通過細(xì)膜上出現(xiàn)的瞬間小孔而進(jìn)入細(xì)胞。化學(xué)方法有DNA-陽離子-二甲基亞砜法。基因轉(zhuǎn)移的生物學(xué)方法包括細(xì)胞融合法、脂質(zhì)體介導(dǎo)法、原生質(zhì)體融合法等。除以上三種方法外，又出現(xiàn)了顆粒轟擊技術(shù)，就是將外源DNA包被在金屬上，在電場中包被DNA的金屬顆粒獲得能量并以高速度運動，穿入靶細(xì)胞組織或器官內(nèi)，由于這種金屬顆粒可以涂成薄膜狀，所以可實現(xiàn)較多細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)移同時發(fā)生，改進(jìn)了其它物理方法基因轉(zhuǎn)移效率低的缺點。盡管物理法、化學(xué)法及生物學(xué)法在基因轉(zhuǎn)移中被廣泛應(yīng)用，但由于基因轉(zhuǎn)移效率較低，在短時間內(nèi)難以取得基因治療所需要的108~1012個轉(zhuǎn)化細(xì)胞，因而在基因治療的應(yīng)用中仍然具有一定局限性，雖然對其進(jìn)行了一些改造，如顆粒轟擊技術(shù)的處理和應(yīng)用，但也不能完全克服以上缺點，故而在基因治療中不得不救助于其它技術(shù)，目前被廣泛應(yīng)用的一種技術(shù)就是逆轉(zhuǎn)病毒載體技術(shù)（RMGT）。逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的基因技術(shù)是目前將外源基因?qū)爰?xì)胞的最有效的方法。此系統(tǒng)包括重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和包裝細(xì)胞兩個部分，廣泛應(yīng)用的逆病毒載體LNL6是以Moloney鼠白血病病毒（MO-MLV）改建的。該病毒為RNA病毒，感染細(xì)胞后，其基因組RNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)產(chǎn)生雙鏈DNA拷貝插入宿主染色體形成前病毒，前病毒轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生正鏈即為病毒基因組RNA。整個基因組從5′端到3′端依次是：5′長末端重復(fù)順序（LTR）編碼病毒內(nèi)部結(jié)構(gòu)蛋白的gag基因，編碼蛋白的pol基因，編碼外殼蛋白的env基因以及3′LTR和一個介子5′LTR和gag基因之間的包裝信號。將病毒蛋白編碼區(qū)gag、pol、env全部切除，代之以外源性目的基因即改建為病毒載體，保留了LTR和包裝信號，是一種復(fù)制缺陷性病毒。同時，設(shè)計一種包裝細(xì)胞系，其內(nèi)含有輔助病毒基因組，即為包裝信號缺乏的MO-MLV。當(dāng)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體進(jìn)入包裝細(xì)胞系時，載體基因就被包裝形成完整的病毒顆粒，于是包裝細(xì)胞系就成了制造病毒載體的生產(chǎn)細(xì)胞系。將靶細(xì)胞與生產(chǎn)細(xì)胞系其同培養(yǎng)或是收集含有載體病毒的生產(chǎn)細(xì)胞系上清液與靶細(xì)胞一起孵育，即可有效地進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體技術(shù)的優(yōu)點在于轉(zhuǎn)染譜廣，可感染包括人體在內(nèi)的多種動物細(xì)胞類型，一次可感染大量細(xì)胞，轉(zhuǎn)染率高達(dá)100%，轉(zhuǎn)染的基因可為單拷貝和少數(shù)拷貝，能準(zhǔn)確地整合到宿主細(xì)胞基因組中，整合率高，且能長期有效地表達(dá)。

實現(xiàn)基因的直接、間接轉(zhuǎn)移，有很多有效的方法，如物理法、化學(xué)法、融合法以及逆轉(zhuǎn)錄病毒載體基因轉(zhuǎn)移法等多種。但這些方法中，由于物理法、化學(xué)法以及融合法等的基因轉(zhuǎn)移效率較低，在短時間內(nèi)難以取得基因治療所需要的105一101’個轉(zhuǎn)化細(xì)胞，因此，在基因治療中的實際應(yīng)用受到很多限制。最近，根據(jù)顆粒轟擊技術(shù)(Particlebombardmenttechnique）的原理研究的許多裝置，可能提高物理基因轉(zhuǎn)移方法的效率。但仍然不如逆轉(zhuǎn)錄病毒載體技術(shù)的基因轉(zhuǎn)移效率高。

基因轉(zhuǎn)移是指用適當(dāng)手段將外源基因?qū)塍w外或體內(nèi)受體細(xì)胞中的分子生物學(xué)技術(shù)。常用方法可概括為物理、化學(xué)和生物三大類，前兩類是非病毒的方法，生物方法主要指病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移，包括RNA病毒、DNA病毒兩類，物理化學(xué)法攜帶的遺傳物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)易受DNA酶降解，而且不容易穩(wěn)定地存在細(xì)胞基因組中，但是這些方法不存在野生型病毒污染．比較安全．病毒方法的特點是基因轉(zhuǎn)移效率較高，但是安全性問題需要重視。理想的基因轉(zhuǎn)移方法應(yīng)符合以下要求，(1)高效的轉(zhuǎn)移率；(2)外源基因定向?qū)胧荏w細(xì)胞，且能轉(zhuǎn)導(dǎo)非分裂相的細(xì)胞；(3)能穩(wěn)定地、定點整合到宿主染色體上．最好是同源重組；(4)較高的安全性．對人體不構(gòu)成較嚴(yán)正重的危害；(5)容易操作．易推廣應(yīng)用。

樓上說的都很全。常用方法可概括為物理、化學(xué)和生物三大類，前兩類是非病毒的方法，生物方法主要指病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移，包括RNA病毒、DNA病毒兩類，物理化學(xué)法攜帶的遺傳物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)易受DNA酶降解，而且不容易穩(wěn)定地存在細(xì)胞基因組中，但是這些方法不存在野生型病毒污染。比較安全．病毒方法的特點是基因轉(zhuǎn)移效率較高，但是安全性問題需要重視。

總結(jié)

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