基因轉(zhuǎn)移是用物理的、化學的或生物學的方法將目的基因?qū)胧荏w細胞并使之表達的一種技術(shù)。物理方法包括顯微鏡注射法、電脈沖介導法。顯微注射法是應用特別的玻璃顯微注射器在顯微鏡下把重組DNA導入靶細胞；電脈沖介導法又稱電穿孔法，是指在高壓電脈沖的作用下，使細胞膜上出現(xiàn)瞬間微小的孔洞，從而介導不同細胞之間的原生質(zhì)膜發(fā)生融合，使外源DNA通過細膜上出現(xiàn)的瞬間小孔而進入細胞。化學方法有DNA-陽離子-二甲基亞砜法。基因轉(zhuǎn)移的生物學方法包括細胞融合法、脂質(zhì)體介導法、原生質(zhì)體融合法等。除以上三種方法外，又出現(xiàn)了顆粒轟擊技術(shù)，就是將外源DNA包被在金屬上，在電場中包被DNA的金屬顆粒獲得能量并以高速度運動，穿入靶細胞組織或器官內(nèi)，由于這種金屬顆粒可以涂成薄膜狀，所以可實現(xiàn)較多細胞的基因轉(zhuǎn)移同時發(fā)生，改進了其它物理方法基因轉(zhuǎn)移效率低的缺點。盡管物理法、化學法及生物學法在基因轉(zhuǎn)移中被廣泛應用，但由于基因轉(zhuǎn)移效率較低，在短時間內(nèi)難以取得基因治療所需要的108~1012個轉(zhuǎn)化細胞，因而在基因治療的應用中仍然具有一定局限性，雖然對其進行了一些改造，如顆粒轟擊技術(shù)的處理和應用，但也不能完全克服以上缺點，故而在基因治療中不得不救助于其它技術(shù)，目前被廣泛應用的一種技術(shù)就是逆轉(zhuǎn)病毒載體技術(shù)（RMGT）。逆轉(zhuǎn)錄病毒介導的基因技術(shù)是目前將外源基因?qū)爰毎淖钣行У姆椒ā４讼到y(tǒng)包括重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和包裝細胞兩個部分，廣泛應用的逆病毒載體LNL6是以Moloney鼠白血病病毒（MO-MLV）改建的。該病毒為RNA病毒，感染細胞后，其基因組RNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)產(chǎn)生雙鏈DNA拷貝插入宿主染色體形成前病毒，前病毒轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生正鏈即為病毒基因組RNA。整個基因組從5′端到3′端依次是：5′長末端重復順序（LTR）編碼病毒內(nèi)部結(jié)構(gòu)蛋白的gag基因，編碼蛋白的pol基因，編碼外殼蛋白的env基因以及3′LTR和一個介子5′LTR和gag基因之間的包裝信號。將病毒蛋白編碼區(qū)gag、pol、env全部切除，代之以外源性目的基因即改建為病毒載體，保留了LTR和包裝信號，是一種復制缺陷性病毒。同時，設(shè)計一種包裝細胞系，其內(nèi)含有輔助病毒基因組，即為包裝信號缺乏的MO-MLV。當逆轉(zhuǎn)錄病毒載體進入包裝細胞系時，載體基因就被包裝形成完整的病毒顆粒，于是包裝細胞系就成了制造病毒載體的生產(chǎn)細胞系。將靶細胞與生產(chǎn)細胞系其同培養(yǎng)或是收集含有載體病毒的生產(chǎn)細胞系上清液與靶細胞一起孵育，即可有效地進行基因轉(zhuǎn)移。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體技術(shù)的優(yōu)點在于轉(zhuǎn)染譜廣，可感染包括人體在內(nèi)的多種動物細胞類型，一次可感染大量細胞，轉(zhuǎn)染率高達100%，轉(zhuǎn)染的基因可為單拷貝和少數(shù)拷貝，能準確地整合到宿主細胞基因組中，整合率高，且能長期有效地表達。

實現(xiàn)基因的直接、間接轉(zhuǎn)移，有很多有效的方法，如物理法、化學法、融合法以及逆轉(zhuǎn)錄病毒載體基因轉(zhuǎn)移法等多種。但這些方法中，由于物理法、化學法以及融合法等的基因轉(zhuǎn)移效率較低，在短時間內(nèi)難以取得基因治療所需要的105一101’個轉(zhuǎn)化細胞，因此，在基因治療中的實際應用受到很多限制。最近，根據(jù)顆粒轟擊技術(shù)(Particlebombardmenttechnique）的原理研究的許多裝置，可能提高物理基因轉(zhuǎn)移方法的效率。但仍然不如逆轉(zhuǎn)錄病毒載體技術(shù)的基因轉(zhuǎn)移效率高。

基因轉(zhuǎn)移是指用適當手段將外源基因?qū)塍w外或體內(nèi)受體細胞中的分子生物學技術(shù)。常用方法可概括為物理、化學和生物三大類，前兩類是非病毒的方法，生物方法主要指病毒介導的基因轉(zhuǎn)移，包括RNA病毒、DNA病毒兩類，物理化學法攜帶的遺傳物質(zhì)在細胞內(nèi)易受DNA酶降解，而且不容易穩(wěn)定地存在細胞基因組中，但是這些方法不存在野生型病毒污染．比較安全．病毒方法的特點是基因轉(zhuǎn)移效率較高，但是安全性問題需要重視。理想的基因轉(zhuǎn)移方法應符合以下要求，(1)高效的轉(zhuǎn)移率；(2)外源基因定向?qū)胧荏w細胞，且能轉(zhuǎn)導非分裂相的細胞；(3)能穩(wěn)定地、定點整合到宿主染色體上．最好是同源重組；(4)較高的安全性．對人體不構(gòu)成較嚴正重的危害；(5)容易操作．易推廣應用。

樓上說的都很全。常用方法可概括為物理、化學和生物三大類，前兩類是非病毒的方法，生物方法主要指病毒介導的基因轉(zhuǎn)移，包括RNA病毒、DNA病毒兩類，物理化學法攜帶的遺傳物質(zhì)在細胞內(nèi)易受DNA酶降解，而且不容易穩(wěn)定地存在細胞基因組中，但是這些方法不存在野生型病毒污染。比較安全．病毒方法的特點是基因轉(zhuǎn)移效率較高，但是安全性問題需要重視。

總結(jié)

以上是生活随笔為你收集整理的基因治疗中，基因转移有哪些方法？的全部內(nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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