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如何从产品中检测其是否含有转基因产物呢?

發布時間:2023/11/25 万象百科 69 博士
生活随笔 收集整理的這篇文章主要介紹了 如何从产品中检测其是否含有转基因产物呢? 小編覺得挺不錯的,現在分享給大家,幫大家做個參考.
為使外源基因在導入植物中高效表達且易于篩選,在構建表達載體的時候常加上能在植物細胞中表達的各種啟動子、終止子和標記基因。據統計,有80%~90%商業化轉基因作物使用了CaMV35S、FMV35S啟動子,90%以上的轉基因作物使用了NOS終止子與NPTⅡ標記基因。在轉基因玉米、大豆、油菜中使用比較廣泛的抗蟲基因是Cry1A(b),抗除草劑基因EPSPS和PAT。因此可以檢測材料中是否含有外源啟動子、終止子、標記基因、目的基因及其表達產物來判斷是否含有轉基因成分。檢測方法主要有:1、外源蛋白質檢測??? 蛋白質檢測是利用免疫化學原理,將外源基因表達的蛋白質制備抗體,根據抗原抗體特異性結合和酶對底物的高效催化的原理,從而達到檢測目標蛋白的目的。主要有酶聯免疫吸附法(Enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)、試紙條,以及Western雜交技術等。其中,ELISA試劑盒是到目前為止轉基因檢測系列產品最成熟的商業化試劑盒產品,檢測靈敏度高于0.1%,具有可定量分析、操作簡單、易自動化等優點。而試紙條法檢測表達蛋白的最低值可達到0.15%,且簡單、快速、易操作,可隨身攜帶。目前已開發出針對檢測抗除草劑的莽草酸羥基乙酰轉移酶(EPSPS)、草丁膦乙酰轉移酶(PAT)以及抗蟲的Bt毒蛋白(CrylAc,CrylC,Cry3A,Cry2A,Cry9C編碼產物)等多種商業化檢測試劑盒和試紙條出售。??? Western雜交是植物基因工程中檢測外源基因是否表達出蛋白質的權威方法。但該方法需要轉膜及雜交,操作繁瑣且費用高,不適合大批量樣品的檢測。??? 由于外源基因的表達有組織特異性,對一些誘導型基因表達的蛋白質在特定的材料中無法檢測;而且因為蛋白質容易在加工過程中變性,因此不適用于深加工產品的檢測,只適用于原材料和淺加工產品的檢測;需要制備特異的抗體,制備過程繁瑣。這些因素都極大的限制了其在轉基因檢測方面的應用。2、 外源DNA檢測??? 主要有分子雜交技術和PCR技術。分子雜交技術主要包括Southern和Northern雜交,分別從整合、轉錄水平檢測外源基因的行為,準確度高、特異性強,但需要轉膜及雜交,操作繁瑣、費用高,不適合大批量樣品的檢測,一般僅用于對PCR結果的驗證。??? PCR(Polymerase Chain Reaction)技術,是目前轉基因檢測中應用最廣泛的技術,具有快速、簡便、靈敏等諸多優點。3、基因芯片(Gene chip)技術? 在轉基因檢測中,將目前通用的報告基因、抗生素抗性標記基因、啟動子和終止子的特異片斷制成檢測芯片與待測產品的DNA進行雜交,雜交信號由掃描儀掃描后再經計算機軟件進行分析,就可以判斷待測樣品是否為轉基因產品。 Serge Leimanis等建立了同時對Btll、Starlink、MON810、GA21、T25、T45、Topasl9/2和轉基因大豆9種轉基因作物的CaMV35S、NOS終止子、NPTⅡ標記基因3種元件進行檢測的基因芯片技術,經5個實驗室測試,檢測靈敏度可達0.1%~0.3%。基因芯片技術具有高通量、靈敏度高、特異性強、假陽性率和假陰性率低、操作簡便、自動化程度高等特點,是一種在轉基因檢測中極有發展前景和應用價值的技術,也是近年來國內外研究的熱點。4、近紅外光譜掃描技術、色譜技術:針對轉基因作物中如蛋白質含量、氨基酸組成、油分含量以及纖維結構等的改變,可采用近紅外光譜掃描技術、色譜技術進行檢測,該方法具有操作簡單、成本低、無污染、快速、高效的特點。

目前轉基因的檢測方法轉基因作物檢測方法大體分為兩種:一是檢測是否含有外源蛋白,即外源基因表達產物,主要采用酶聯免疫吸附法和試紙條法;二是檢測是否含有外源基因(DNA),主要有Southern雜交技術、基因芯片法和PCR檢測法。理論上來說,以上所介紹的轉基因檢測方法,只要改變相應的檢測靶標,都可檢測不同的轉基因產品。但是實際應用中,以檢測外源蛋白的轉基因檢測方法存大很大的局限性,食品的復雜成分會干擾檢測效果,并且加工過的轉基因食品中的蛋白質抗原性很容易受破壞,從而會影響檢測結果的靈敏度。目前,所有商業化的轉基因食品都有相應的PCR檢測方法標準。

一般而言,單純從食品的外觀和營養成分,一般無法區分轉基因食品與非轉基因食品。目前,科學界主要是從分子水平檢測樣品中有沒有外來的基因和蛋白,進而確定是否含有轉基因成分。想我們實驗室里,主要是將樣品的DNA提取出來,通過PCR方法進行篩查,檢測其中是否含有轉入的基因,進行轉基因操作時,有很多通用的調控原件,如啟動子和終止子等,這些調控原件在大部分轉基因產品中是通用的,我們可以進行初步篩查。一旦檢測到這些原件的存在,則意味著它很可能是轉基因食物,之后會進一步分析轉進去的是什么樣的基因”。另外補充一下一些其他的方法。據了解,目前,除了實驗室的PCR檢測方法外,還有一些公司開發出簡便的轉基因檢測手段,例如用于蛋白質檢測的試紙條。以玉米粉為例,將其用水沖泡,并把試紙插入浸泡液中,根據試紙顯示的條帶就可以測出是否含有轉基因成分。此外,在田間檢查時,將農作物的葉子摘下來,擠出汁液并滴在試紙條上,也能檢測轉基因成分。 “但對于深加工食品,試紙條檢測方法就不太適用,因為加工處理會影響檢測的效果”,檢測人員說,對轉基因作物進行加工的手段,會影響人們對轉基因成分的測試,“例如我們吃的大豆油,在壓榨和精煉的過程中就已經把DNA和蛋白質都去除掉了。這個時候要證明它是轉基因的很困難”。

總結

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