原核生物转录组测序原理及具体操作步骤?
生活随笔
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原核生物转录组测序原理及具体操作步骤?
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原核生物轉錄組測序原理是利用第二代高通量測序技術對原核生物的轉錄本(mRNA和非編碼RNA)進行測序,全面快速地獲取特定微生物在特定狀態下的所有轉錄本的信息。通過轉錄組測序研究可以揭示微生物不同表現型形成的分子調控機制。 原核生物的mRNA一般為多順反子,直接拼接效果較差。若沒有參考基因組,需要先做一個基因組掃描圖來輔助后期轉錄組分析。原核生物mRNA沒有Poly A結構,無法用Oligo dT純化mRNA,必須通過去除總RNA中的核糖體RNA來純化得到mRNA。 鏈特異性轉錄組合成cDNA第二條鏈時,加入的dNTPs試劑中用dUTP代替dTTP,使cDNA第二鏈中僅包含A/U/T/G。在PCR擴增前,用UNG酶將cDNA第二鏈消化,從而使文庫中僅包含cDNA第一鏈。
總結
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