現(xiàn)在進(jìn)行復(fù)雜疾病研究最常用的測序方法是全基因組測序或全外顯子測序后進(jìn)行關(guān)聯(lián)研究，這方面的研究失敗率還是比較高的，究其原因，就在于二代測序帶來的誤差，使我們很難檢測到罕見變異，而罕見變異才是在復(fù)雜疾病中發(fā)揮重要作用的關(guān)鍵所在，很多疾病是由于多種罕見突變同時出現(xiàn)才引發(fā)的。比如，有研究人員對幾千個人的外顯子組進(jìn)行測序和分析后推斷，大多數(shù)單核苷酸變異是罕見的，在樣本群體中的發(fā)生率要小于0.5%。然后，現(xiàn)在的DNA測序技術(shù)對于檢測罕見突變的能力，要受到樣本制備、測序和分析步驟中引入誤差的限制。這種誤差導(dǎo)致有大于1%的堿基是錯誤識別的，這種誤差率對于復(fù)雜疾病尤其是癌癥研究將是個決定性的障礙。目前要降低誤差率的方法有以下兩種：一是進(jìn)行雙重測序，通過對DNA雙鏈的兩條鏈進(jìn)行分別標(biāo)記和測序，這種方法能將誤差率降為每十億個核苷酸序列中僅有一個人為突變，因此對檢測罕見DNA變異和進(jìn)行單分子計數(shù)有很高的靈敏度，可以精確地確定DNA或RNA拷貝數(shù)的絕對值；二是在提取DNA時加入金屬螯合劑來降低DNA提取過程中的氧化導(dǎo)致測序結(jié)果的偏差，這樣能夠幫助提高測序結(jié)果的精確度，測序過程都要用到的聚合酶往往也有一定的錯誤率，如果可以開發(fā)出一種較低錯誤率的聚合酶，對于提高測序結(jié)果精確度也將十分有幫助；此外，還有一種方法是進(jìn)行單細(xì)胞測序，他可以幫助發(fā)現(xiàn)腫瘤中的特定突變，這種突變有可能會導(dǎo)致此類腫瘤對某一種藥物不敏感，即幫助發(fā)現(xiàn)耐藥性的罕見突變。

總結(jié)

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