分子模擬對接和定點突變提高10β–去乙酰巴卡亭-華南農業大學學報

華南農業大學學報?2018,?39(5):?87-92

Journal?of?South?China?Agricultural?University doi:?10.7671/j.issn.1001-411X.2018.05.013

歐陽萍蘭,?黃佳俊,?林淑玲,?等.?分子模擬對接和定點突變提高10β–去乙酰巴卡亭Ⅲ乙酰氧基轉移酶的活力[J].?華南農業大學學報,?2018,?39(5):?87-92.

分子模擬對接和定點突變提高10β–去乙酰巴卡亭Ⅲ

乙酰氧基轉移酶的活力

1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1 1

歐陽萍蘭 ，黃佳俊 ，林淑玲 ，魏　韜 ，林俊芳 ，郭麗瓊 ，劉俊峰，劉綺倩

(1?華南農業大學?食品學院，廣東?廣州?510642；??2?廣東省微生態制劑工程技術研究中心，廣東?廣州?510640)

摘要: 【目的】提高 10β –去乙酰巴卡亭Ⅲ乙酰氧基轉移酶(DBAT)活力，從而更高效地體外酶促合成巴卡亭Ⅲ。

【方法】通過DBAT與其天然底物乙酰CoA 的計算機分子模擬對接，選定C165W、N300I、F160C?3個氨基酸殘基進

行單點定點突變。突變基因經大腸埃希菌重組表達，突變重組酶特性經體外酶促反應測定。【結果】3種突變重組酶

的相對分子質量為67?000；最適反應溫度均為32.5?℃，與野生酶DBAT一致；DBATF160C 與DBAT 的最適反應

C165W N300I C165W F160C N300I

pH為7.5，略高于DBAT 和DBAT 的最適反應pH(7.0)；DBAT 、DBAT 和DBAT 的比活力與

DBAT相比分別提高了61.5%、59.6%和19.2%，催化效率分別提高了55.4%、35.1%和2.9%，3種突變酶的米式常

數(Km)和最大反應速率(vmax)均高于DBAT。【結論】疏水突變導致突變酶的比活力相比野生型均有顯著提高，研

究結果為體外高效酶促合成紫杉醇化學半合成的直接前體物巴卡亭Ⅲ奠定了基礎。

關鍵詞: 10β–去乙酰巴卡亭Ⅲ乙酰氧基轉移酶；分子模擬對接；定點突變；比活力；酶促反應；巴卡亭Ⅲ

中圖分類號: Q55；S18?　　　　?文獻標志碼: A　　　　?文章編號: 1001-411X(2018)05-0087-06

Increase of 10-deacetyl baccatin Ⅲ-10β-O-acetyl transferase activity

with molecular docking simulation and site-directed mutation

1,2 1,2 1,2 1,2

總結

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