生物基礎實驗之PCR驗證

文章目錄

• 生物基礎實驗之PCR驗證
• • 實驗步驟一
  • 實驗步驟二
  • 實驗步驟三 配膠
  • 實驗步驟四 電泳
  • 實驗步驟五 跑膠

實驗步驟一

在離心管加入7.5μL Master Mix 溶液，5.5μL 蒸餾水，引物各0.5μL μL 以及1μL 模板（各種植物的DNA）。

實驗步驟二

1 95℃ 3min 升溫
2 95℃ 變性 30 s
3 58℃ 或者 60 ℃ 退火 30s
4 72℃ 延伸 45s
5 72℃ 延伸 45s 結束
選擇 Files, 點擊program，點擊新建。然后點擊Header, 如果是做PCR的話，Heaterd Lid 溫度選擇105℃。其他不用管。 圖片實際的翻譯時間設置可能和文字步驟不一致，以文字步驟為準。

實驗步驟三 配膠

在等待PCR結果的過程中，先進行配膠。稱量0.3g瓊脂糖，加入20ml TAE 溶液 ，混合后放入微波爐中2min后溶液呈透明狀后加入1μmol/L的核酸染料。（實驗過程必須戴手套）。 瓊脂濃度根據DNA片段大小來決定，片段大，濃度低，1000bp濃度約為1.5%。片段小，濃度高，200bp濃度約為2-3%。放入凝膠槽中。根據需要，選擇不同大小的插板如下圖所示，插板有大有小。批量大的實驗可用大插板。 等待15分鐘凝固后轉移到電泳儀器中。

實驗步驟四 電泳

取PCR反應好的DNA 7.0μL 插入點樣孔中，最右側放入Marker5000（視DNA長度選擇不同的Marker）。電壓U=140V， 反應時間=15分鐘。然后開始電泳啦！

實驗步驟五 跑膠

電泳15分鐘結束后，取出凝膠后小心移入電泳儀中進行讀取。

點擊左上角照相，再點擊左下腳照相機圖標，即開始分析，得到電泳結果。根據DNA MAKER 對照DNA片段大小。到此實驗就結束啦！

總結

以上是生活随笔為你收集整理的[生命科学] 生物基础实验之PCR验证的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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