17號給SY5Y換液，細胞密度大概在40-50，18號下午觀察到SY5Y略顯渾濁且有炫富小黑點，未在意。19號上午再次觀察發現溶液渾濁顯現為渾白色，并伴有熱烈酸腐味道。鏡下觀察絕大多數細胞脫離底壁懸浮收縮，確認細胞被污染且無挽救之可能。首要問題是排查污染源，四瓶細胞悉數覆沒，可能與培養液，操作不當、培養箱滅菌等有關。將新鮮培養液放置于培養箱中，24小時后出現低密度小黑點，再次過夜后溶液渾濁不堪，小黑點數量增多密密麻麻。將新配的培養液按照如上方式操作做，48小時后依然清澈無污染。斷定培養液是污染源。
4瓶SY5Y全軍覆沒是一個不小的損失，是一個打擊也是一次經驗。無菌意識不強，操作中經常出現失誤，致使細胞污染。好在SY5Y已保存留種6只，不用再次從新訂購。22號復蘇SY5Y一只，傳代至2瓶，生長良好。
PC12和SY5Y都是貼壁生長的細胞，前者貼壁疏松、后者完全貼壁。PC12吹打即可脫落，SY5Y需用含有EDTA的胰酶消化后再吹打。之前的實驗中，對PC12傳代時，使用胰酶消化細胞。傳代后的細胞一度成團現象嚴重，不利于生長。接下來的實驗中注意到這個們提并做了探究，分別用胰酶消化20S、10S、0S的細胞，吹散程度并無差別。這表明胰酶消化時間對細胞成團的影響不大。有些細胞剛傳代后鏡下觀察并無成團現象，但4小時候觀察發現，有大量成團細胞，甚至肉眼可察。請教萬老師后了解到，吹散的細胞有成團趨勢，易成團。多次著實用力吹打有利于解決這一問題。另外，為了使傳代后的細胞增殖更快，一般在細胞密度較大時才進行傳代，且1：2傳代。這就造成了傳代后的細胞密度過大，吹打充分后，也易成團。11.23凍存了12只PC12（5百萬/ml），另一瓶總體密度約85%，1：3傳代，離心后著實用力吹打。今日觀察發現，成團較少，分布均勻，生長良好。

總結

以上是生活随笔為你收集整理的细胞污染及污染源排查与细胞传代、冻存的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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