基因捕获是什么技术?
生活随笔
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基因捕获是什么技术?
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基因捕獲技術是一種基因克隆的方法,是繼自然突變、物理突變和化學突變之后發展起來的新的分子生物學方法,可用于尋找、鑒定和研究大量未知功能和已知功能的活化基因。該技術操作的核心是基因捕獲載體,是一種帶有報告基因和/或選擇標記基因的不完整的基因表達載體,這些載體所帶的基因只有在整合到宿主功能基因內部且與融合的宿主基因編碼框一致時才能得以表達。根據報告基因在載體中的位置及報告基因激活表達的方式,基因捕獲載體分為3種類型:增強子捕獲載體,啟動子捕獲載體以及基因捕獲載體。增強子捕獲載體含有一個最小的啟動子和翻譯起始位點,當載體整合到順式增強子元件附近時,此增強子將調控報告基因的表達 。關于增強子捕獲的誘變比率還未見報道,但插入的性質預示由增強子捕獲產生功能失活的突變比率較低,因此,增強子捕獲載體在小鼠體系中未得到廣泛應用。啟動子捕獲載體通常由不含啟動子成分的報告基因和一篩選標記基因組成,只有當載體插入到內源基因編碼區序列中產生融合轉錄本時報告基因才可能表達 ,因而啟動子捕獲的致突變比率很高。然而載體插入到外顯子的頻率非常低,捕獲效率較增強子捕獲至少低200倍?;虿东@載體中在無啟動子序列的報告基因上游和下游分別含有剪接受體和多聚腺苷酸加尾序列,當含有順式作用的啟動子和增強子元件被捕獲基因轉錄激活時,載體中SA 與內源基因剪接供體作用產生上游內源基因編碼序列與報告基因融合轉錄本,使內源基因發生突變,同時報告基因的表達提示內源基因的表達特點。
總結
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